慢性非細(xì)菌性前列腺炎SD大鼠前列腺平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化及意義.pdf

1、目的:通過(guò)測(cè)定體外培養(yǎng)的正常SD大鼠和慢性前列腺炎SD大鼠前列腺平滑肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度,來(lái)了解慢性前列腺炎前列腺平滑肌細(xì)胞與正常前列腺平滑肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的差異及其意義,從而探討細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子在慢性前列腺炎發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:隨機(jī)將50只大鼠等分為炎癥組和正常對(duì)照組,取10只正常SD大鼠進(jìn)行前列腺蛋白的提取純化,分別于第0、30d對(duì)炎癥組每只大鼠進(jìn)行皮內(nèi)多點(diǎn)注射大鼠前列腺蛋白提純液和FCA乳劑(比例為1:1的

2、混懸液)1.0ml,濃度為40mg/ml,每只腹腔注射百白破疫苗0.5ml,以造成自身免疫性的慢性前列腺炎癥,另取正常SD大鼠同樣方法注射生理鹽水作為對(duì)照組;造模45天后,每只大鼠取部分前列腺組織HE染色,石蠟包埋切片后組織學(xué)觀察,證實(shí)造模成功后離體培養(yǎng)SD大鼠前列腺平滑肌細(xì)胞,運(yùn)用差速貼壁法純化前列腺平滑肌細(xì)胞,運(yùn)用免疫組化SP法證實(shí)培養(yǎng)出來(lái)的細(xì)胞為平滑肌細(xì)胞;用消化法將細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,將高度特異性鈣離子熒光指示劑Fluo3-AM加

3、入該細(xì)胞懸液中,置二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育1h負(fù)載細(xì)胞,離心,去掉多余的染料。用無(wú)鈣緩沖液反復(fù)洗滌3次,最后應(yīng)用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果:通過(guò)流式細(xì)胞儀用480nm波長(zhǎng)激發(fā)Fluo3-AM,檢測(cè)慢性前列腺炎組SD大鼠以及對(duì)照組SD大鼠前列腺平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子在發(fā)射波長(zhǎng)為525nm時(shí)的熒光強(qiáng)度值,分析比較測(cè)得平行熒光強(qiáng)度值發(fā)現(xiàn)模型組的熒光值明顯高于正常對(duì)照組SD大鼠(P＜0.05),差異有顯著性。
　　結(jié)論

4、:當(dāng)用480nm波長(zhǎng)激發(fā)Fluo3-AM時(shí),其熒光強(qiáng)度與游離鈣離子濃度成正比,以上結(jié)果表明慢性前列腺炎SD大鼠平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度較正常SD大鼠是升高的,我們認(rèn)為由于慢性前列腺炎引起的前列腺平滑肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的升高,導(dǎo)致了鈣穩(wěn)態(tài)產(chǎn)生波動(dòng),使細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生鈣超載等一系列活動(dòng),繼而影響到前列腺組織及細(xì)胞的各項(xiàng)生理功能,前列腺平滑肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度變化可能是慢性前列腺炎發(fā)病的重要影響因素,PSMCs內(nèi)游離鈣離子濃度在發(fā)病機(jī)制中具有一