電針對腦出血模型大鼠腦內(nèi)補(bǔ)體C3、C4介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的影響機(jī)制研究.pdf

1、目的： 腦出血(intra cerebral hemorrhage，ICH)是臨床上常見的腦血管疾病，發(fā)病率，病死率和致殘率較高，嚴(yán)重威脅人類健康。近年來越來越多的證據(jù)表明，免疫因素及炎癥反應(yīng)在腦出血的病理生理中起重要作用，而補(bǔ)體系統(tǒng)激活是腦出血損傷病理機(jī)制中重要的因素之一。本實(shí)驗(yàn)在目前針灸治療中風(fēng)病研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合中，西醫(yī)關(guān)于中風(fēng)發(fā)病機(jī)制的新認(rèn)識，研究補(bǔ)體C3、C4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在腦出血后補(bǔ)體級聯(lián)反應(yīng)中的重要作用以及電針?biāo)疁?/p>

2、、內(nèi)關(guān)、足三里穴對腦出血模型大鼠補(bǔ)體介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的影響及作用機(jī)理。 方法： 選擇健康Wistar大鼠60只(平均體重200-250g)，雌雄各半。將大鼠編號，查隨機(jī)數(shù)字表，分為4組：正常組、生理鹽水組、模型組和電針治療組。根據(jù)出血時(shí)間，正常組、假手術(shù)組分別分為3h、24h、72h組，每組2只。模型組、電針治療組分別分為3h、24h、72h組，每組8只。模型組采用0.4ul膠原酶VII注射大鼠尾殼核(前囟向后0.2mm，

3、右旁開2.9mm，深6mm)誘導(dǎo)大鼠腦出血的方法。模型組分別于造模后3h、24h、72h時(shí)取材。 電針組采用電針治療腦出血模型大鼠，穴取水溝穴、內(nèi)關(guān)穴(雙側(cè))、足三里穴(雙側(cè))。電針3h、24h、72h組分別于造模后即刻針刺一次，然后每過12小時(shí)針刺1次，電針3h組共針刺1次，電針24h組共針刺3次，電針72h組共針刺7次。水溝和右側(cè)大鼠耳朵接一對電極，同側(cè)內(nèi)關(guān)和足三里接一對電極，連續(xù)波，頻率120次/min，強(qiáng)度1mA，每次留

4、針30min。然后分另4于造模后3h、24h、72h時(shí)取材。 以上四組大鼠均用10％水合氯醛腹腔注射麻醉，開胸經(jīng)升主動脈依次灌入生理鹽水100ml、4℃預(yù)冷的合4％多聚甲醛的0.01 mol/L磷酸緩沖液(PBS．pH7.4) 400ml。灌畢取腦，置于4％多聚甲醛溶液過夜后固定。以注射點(diǎn)為中心冠狀石蠟切片，片厚5μm，切10片。采用免疫組化法測量大鼠腦組織中補(bǔ)體C3、C4，在400倍高倍鏡下隨機(jī)取血腫中周圍4個(gè)不重疊視野．計(jì)數(shù)

5、補(bǔ)體C3和補(bǔ)體C4陽性細(xì)胞數(shù)．統(tǒng)計(jì)分析。觀察神經(jīng)缺缺損行為體征并連暫評分。 結(jié)果： 1.模型組和電針組在神經(jīng)行為學(xué)評分的比較 3h電針組神經(jīng)行為學(xué)評分較3h模型組降低，但無顯著性差異(P>0.05)；24h電針組較24h模型組明顯降低(P<0.05)，有顯著性差異；72h電針組較72h模型組明顯降低(P<0.05)，有顯著性差異。 2.各組腦組織補(bǔ)體C3的表達(dá)3h 模型組補(bǔ)體C3表達(dá)較假手術(shù)組無明顯變化(P>0.

6、05)，無顯著性差異；24h模型組較假手術(shù)組明顯升高(P<0.05)，有顯著性差異；72h模型組較假手術(shù)組明顯升高(P<0.01)，有非常顯著性差異；3h電針組補(bǔ)體C3表達(dá)較3h模型組降低(P>0.05)，無顯著性差異；24h電針組較24h模型組降低(P<0.05)，有顯著性差異；72h電針組較72h模型組明顯降低(P<0.01)，有非常顯著性差異。 3.各組腦組織補(bǔ)體C4的表達(dá) 3h模型組補(bǔ)體C4表達(dá)較假手術(shù)組無明顯變化(P>

7、0.05)，無顯著性差異；24h模型組較假手術(shù)組明顯升高(P<0.05)，有顯著性差異；72h模型組較假手術(shù)組明顯升高(P<0.01)，有非常顯著性差異；3h電針組補(bǔ)體C4表達(dá)較3h模型組降低，無顯著性差異(P>0.05)；24h電針組較24h模型組降低(P<0.05)，有顯著性差異；72h電針組較72h模型組明顯降低(P<0.01)，有非常顯著性差異。 4.腦出血后3h、24h、72h血腫周圍腦組織補(bǔ)體C3、C4表達(dá)相關(guān)性分析

8、腦出血后24h、72h血腫周圍腦組織補(bǔ)體C3、C4表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，而腦出血后3h補(bǔ)體C3、C4表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。 結(jié)論： 1.補(bǔ)體系統(tǒng)激活參與了腦出血后炎癥反應(yīng)，可能是腦出血損傷的一個(gè)重要因素之一。 2.補(bǔ)體成分C3、C4在腦出血模型大鼠腦組織中的變化具有動態(tài)一致性。 3.電針?biāo)疁?、?nèi)關(guān)、足三里能改善腦出血大鼠的神經(jīng)缺損行為體征。 4.24h電針組、72h電針組的治療效果比 3h 電針組的治療效