安宮清開靈干預(yù)自發(fā)性高血壓大鼠腦出血模型炎癥反應(yīng)的機(jī)制研究.pdf

1、出血性中風(fēng)(intracerebral hemorrhage，ICH)是一種嚴(yán)重的中風(fēng)亞型，伴有很高的死亡率和致殘率，嚴(yán)重影響著人類的健康。而目前治療腦出血的藥物無一具有突破性的治療效果，尤其是繼發(fā)性腦損傷導(dǎo)致的神經(jīng)功能缺失未得到根本解決。減輕出血后繼發(fā)性腦損傷，營救神經(jīng)元仍然是治療的目標(biāo)，而更好的理解腦出血的病理生理機(jī)制無疑是提高臨床療效的有效途徑。 目前臨床有關(guān)腦出血的認(rèn)識(shí)上，注重血腫的壓迫效應(yīng)，治療上也強(qiáng)調(diào)血腫的清除和促進(jìn)

2、血腫的吸收。但這些治療措施并沒能有效的降低腦出血患者的死亡率和致殘率。雖然現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究也逐漸認(rèn)識(shí)到腦出血后血管反應(yīng)進(jìn)而級(jí)聯(lián)的炎癥反應(yīng)在腦微環(huán)境的破壞，進(jìn)而神經(jīng)細(xì)胞損傷的病理性過程中的作用，但是炎癥反應(yīng)并沒有引起臨床醫(yī)生的重視，而且臨床上也缺乏相應(yīng)的治療藥物。因此，研制一種針對(duì)腦出血后炎癥反應(yīng)的藥物是當(dāng)務(wù)之急。 本研究認(rèn)為炎癥反應(yīng)導(dǎo)致繼發(fā)性腦損傷發(fā)病機(jī)理與傳統(tǒng)中醫(yī)理論“毒損腦絡(luò)”的病機(jī)相吻合，因此以炎癥反應(yīng)為切入點(diǎn)，探討“解毒通絡(luò)

3、”藥物對(duì)腦出血后繼發(fā)性腦損傷的治療作用具有重要的現(xiàn)實(shí)意義，有望能夠?yàn)槌鲅灾酗L(fēng)的治療提供新型的干預(yù)途徑。 安宮清開靈注射液是在前期973(課題號(hào)：G1999054404)研究成果的基礎(chǔ)上,在863計(jì)劃支持下，結(jié)合出血性中風(fēng)的發(fā)病特點(diǎn)，研制的治療出血性中風(fēng)的新一代中藥制劑，是按照“解毒通絡(luò)”的大法組方，主要針對(duì)ICH“毒損腦絡(luò)”病機(jī)而設(shè)立的，由梔子苷、黃芩苷、豬去氧膽酸、珍珠母水解液和三七的有效組分組成，具有“解毒通絡(luò)"的功效。

4、 研究的目的主要是(1)觀察腦出血后炎癥反應(yīng)與腦組織繼發(fā)性病理損傷之間的關(guān)系；(2)觀察安宮清開靈干預(yù)腦出血后炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制。 本研究采用尾狀核膠原酶注射法復(fù)制SHR．大鼠腦出血模型，采用放射免疫、酶聯(lián)免疫吸附方法、免疫組織化學(xué)染色、HE染色、Weatem Blotting等實(shí)驗(yàn)手段觀察了：①腦出血后TNF-α、IL-1β和ICAM-1的時(shí)程表達(dá)；②TNF-α與腦出血后炎癥反應(yīng)啟動(dòng)及IL-1β、ICAM-1生成表達(dá)和中

5、性白細(xì)胞活化的關(guān)系；③腦出血后腦組織的病理形態(tài)學(xué)變化以及安宮清開靈的干預(yù)特征；④安宮清開靈對(duì)前炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的作用效果；⑤安宮清開靈對(duì)黏附分子和中性白細(xì)胞活化的影響；⑥安宮清開靈對(duì)腦出血后核轉(zhuǎn)錄因子和熱休克蛋白-70表達(dá)的影響特征；⑦安宮清開靈對(duì)細(xì)胞凋亡的影響等七個(gè)方面的內(nèi)容。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1．腦出血后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)和7天，腦內(nèi)TNF-α、IL-1β、ICAM-1的含量顯著升高。

6、 2．采用外源性抗體治療后，腦組織和血液中的IL-1β和slCAM-1的含量顯著降低。 3．腦出血后48小時(shí)，基底核部位可見典型的彌漫型出血灶，并有小血腫形成。出血灶中可見廣泛彌漫性結(jié)構(gòu)破壞。出血灶周邊呈現(xiàn)腦水腫、炎細(xì)胞浸潤和微血管不暢等損害表現(xiàn)；而安宮清開靈可顯著減輕該損害，以中、高劑量組最為顯著。腦出血后14天血腫部位形成了膠質(zhì)瘢痕，并可見空洞的形成。而安宮清開靈可顯著減小膠質(zhì)瘢痕的體積以及空洞形成的數(shù)量，以中、高劑量組

7、效果最明顯。 4．放射免疫方法和免疫組織化學(xué)染色方法證實(shí)，ICH后48小時(shí)安宮清開靈可以顯著抑制前炎癥細(xì)胞因子TNF-α表達(dá)，而出血后7天這種抑制作用消失，而對(duì)前炎癥細(xì)胞因子IL-1β表達(dá)的抑制作用能夠從出血后48小時(shí)持續(xù)到出血后7天。 5．酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)和免疫組織化學(xué)染色方法證實(shí)，ICH后48小時(shí)安宮清開靈可以顯著抑制ICAM-1的表達(dá)，作用可以持續(xù)到出血后7天；而對(duì)中性白細(xì)胞活化的抑制作用以出血后48小時(shí)最顯著，至

8、出血后7天抑制作用減弱。 6．免疫組織化學(xué)染色方法證實(shí)，ICH后48小時(shí)安宮清開靈可以顯著抑制NF-kB的激活，而對(duì)HSP-70沒有顯著的促合成作用。 7．免疫組織化學(xué)染色方法證實(shí)，ICH后48小時(shí)安宮清開靈可以減少血腫周圍組織凋亡細(xì)胞的數(shù)量。 總結(jié)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以發(fā)現(xiàn)ICH后48小時(shí)，通過兩種以上的實(shí)驗(yàn)方法證實(shí)，安宮清開靈低、中、高三個(gè)劑量組對(duì)前炎癥細(xì)胞因子(TNF-α和IL-1β)、黏附分子(sICAM-1

9、和ICAM-1)、白細(xì)胞活化的標(biāo)志物MPO、核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB和細(xì)胞死亡的數(shù)量都有顯著的抑制作用，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系，其中以中、高劑量的作用效果最突出。至出血后7天，安宮清開靈對(duì)IL-1β、sICAM-1和MPO仍有一定的抑制作用，也具有一定的劑量依賴關(guān)系，中、高劑量的效果最明顯。可見安宮清開靈在出血的急性期(出血48小時(shí))對(duì)出血側(cè)腦組織炎癥反應(yīng)的啟動(dòng)和細(xì)胞凋亡發(fā)揮了廣泛的抑制作用，并能持續(xù)到出血后的7天。 分析以上實(shí)驗(yàn)

10、結(jié)果，得出如下結(jié)論： 1．炎癥反應(yīng)與腦出血后腦組織的繼發(fā)性病理損傷存在密切的關(guān)系。 2．安宮清開靈注射液通過有效抑制核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB和前炎癥細(xì)胞因子TNF—α和IL-1β和粘附分子、炎性白細(xì)胞的活化等，對(duì)炎癥反應(yīng)呈現(xiàn)顯著的抑制作用。并能改善出血周圍組織循環(huán)，為神經(jīng)組織的再生修復(fù)提供了良好的微環(huán)境。 3．腦出血的病理過程產(chǎn)生的前炎癥細(xì)胞因子、活化的中性白細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)的黏附分子等物質(zhì)從病理性質(zhì)上都