

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)是ErbB家族成員之一,具有酪氨酸激酶活性,是一種重要的跨膜受體。該家族成員還包括HER2/erbB2,HER3/erbB3,HER4/erbB4。表皮生長(zhǎng)因子受體由胞外段,跨膜區(qū)和胞內(nèi)激酶活性區(qū)構(gòu)成。其胞外區(qū)的主要功能是結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子EGF等配體激活受體胞內(nèi)段酪氨酸激酶活性,啟動(dòng)信號(hào)傳導(dǎo)通路,在正常組織及腫瘤組織中起到調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化的作
2、用。EGFR在腫瘤進(jìn)展過程中發(fā)揮了重要的作用,它能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、抑制凋亡以及促進(jìn)腫瘤組織的血管生成等。臨床研究顯示,腫瘤的惡化、患者的低生存率以及對(duì)藥物的低敏感性與腫瘤細(xì)胞胞表達(dá)EGFR分子成正相關(guān)。近年來,隨著癌癥檢測(cè)手段的發(fā)展,在很多癌癥包括前列腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、卵巢癌等患者中檢測(cè)到了EGFR的異常高水平的表達(dá)。因此,EGFR成為腫瘤靶向研究的熱點(diǎn)。兩個(gè)研究比較成功的例子是單克隆抗體和小分子酪氨酸抑制劑(TKI
3、)。其中單克隆抗體方面的Cetuximab、panitumumab,TKI方面的Tarceva(Erlotinib)、Iressa(Gefitinib)等已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)用于臨床的癌癥治療。這兩方面的成功提示我們,靶向EGFR的治療策略是可行的,并將在癌癥治療領(lǐng)域發(fā)揮巨大作用。 在本研究中,我們?cè)噲D通過對(duì)小鼠免疫異種EGFR蛋白,使小鼠產(chǎn)生抗EGFR的抗體,來阻斷EGFR信號(hào)通路,從而達(dá)到抗腫瘤效果。根據(jù)GenBank發(fā)表的雞源
4、EGFR基因序列,我們?cè)O(shè)計(jì)了一對(duì)特異性核苷酸引物,用PCR方法獲得雞源EGFR胞外部分642bp大小的基因片段,并將其克隆到表達(dá)載體pGEX-4T-2上,測(cè)序鑒定正確后,轉(zhuǎn)化到表達(dá)菌株BL21(DE3)中,經(jīng)PCR鑒定和酶切鑒定篩選出陽(yáng)性克隆,IPTG誘導(dǎo),并進(jìn)一步通過Ni-NTA Agarose親合層析純化目的蛋白,純化產(chǎn)物以SDS-PAGE鑒定。純化產(chǎn)物經(jīng)透析復(fù)性,Western blot鑒定其抗原性,得到用于免疫的GST-eEGF
5、R融合蛋白。將14只C57BL16J小鼠隨機(jī)分為2組,GST-cEGFR實(shí)驗(yàn)組7只、生理鹽水對(duì)照組(NS)7只,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照小鼠每只分別于第0,2,3周注射100μgGST-cEGFR融合蛋白和100μL生理鹽水。接種Lewis肺癌細(xì)胞,觀察腫瘤的生長(zhǎng)情況和小鼠狀態(tài)并檢測(cè)小鼠血清中特異性抗EGFR抗體滴度。 實(shí)驗(yàn)中成功克隆了包含642bp的雞源EGFR基因,構(gòu)建了原核表達(dá)重組質(zhì)粒pGEX4T2-cEGFR。cEGFR-GST融合
6、蛋白在大腸桿菌中得到了高效表達(dá),經(jīng)Ni-NTA Agarose純化后得到純度達(dá)85%以上的重組融合蛋白。經(jīng)復(fù)性,融合蛋白以可溶的形式存在,Western blot鑒定該融合蛋白具有抗原性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,GST-cEGFR疫苗組小鼠血清的抗EGFR抗體滴度為1:5000,并對(duì)小鼠腫瘤生長(zhǎng)有一定的抑制效應(yīng)。本研究表明,通過基因工程方法制備出的異種重組EGFR蛋白,可在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)出抗EGFR抗體,成功的打破了小鼠的免疫耐受,有一定的抗腫
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 表皮生長(zhǎng)因子
- 靶向表皮生長(zhǎng)因子受體的新型前抗體制備及抗腫瘤功能研究.pdf
- 腫瘤表皮生長(zhǎng)因子受體PET-CT分子顯像的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 鋅對(duì)燙傷大鼠表皮生長(zhǎng)因子及其受體表達(dá)的影響.pdf
- 米非司酮對(duì)子宮肌瘤培養(yǎng)細(xì)胞雌孕激素、表皮生長(zhǎng)因子受體及表皮生長(zhǎng)因子受體基因表達(dá)的影響.pdf
- 表皮生長(zhǎng)因子受體與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α在肺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義.pdf
- 良、惡性卵巢上皮性腫瘤表皮生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子ɑ及其受體的差異性表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf
- 表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑BPI-2009的抗腫瘤作用及其機(jī)制的研究.pdf
- 表皮生長(zhǎng)因子受體介導(dǎo)的惡性腫瘤的靶向基因治療.pdf
- 表皮生長(zhǎng)因子受體家族在食管癌中的表達(dá)及研究.pdf
- P53和表皮生長(zhǎng)因子受體在胸腺瘤的表達(dá).pdf
- 表皮生長(zhǎng)因子受體反式調(diào)節(jié)G蛋白偶聯(lián)受體功能的研究.pdf
- 表皮生長(zhǎng)因子受體及Ki67在大腸腫瘤組織中的表達(dá)及意義.pdf
- 表皮生長(zhǎng)因子及其受體與子宮肌瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的研究.pdf
- 靶向人表皮生長(zhǎng)因子受體RNAi表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定.pdf
- 表皮生長(zhǎng)因子及其受體在胎兒生長(zhǎng)受限時(shí)的表達(dá)及川芎嗪的作用.pdf
- 胃癌組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α、表皮生長(zhǎng)因子受體和增殖細(xì)胞核抗原的表達(dá).pdf
- 靶向表皮生長(zhǎng)因子受體的全新配體設(shè)計(jì)和篩選.pdf
- 表皮生長(zhǎng)因子及其受體與早期自然流產(chǎn)相關(guān)性研究.pdf
- 腺肌病及子宮肌瘤內(nèi)表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的表達(dá).pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論