表皮生長(zhǎng)因子受體為靶向重組T7噬菌體抗腫瘤疫苗構(gòu)建及免疫活性研究.pdf

1、噬菌體表面展示技術(shù)是將外源蛋白或多肽以融合蛋白形式展示在噬菌體的殼蛋白上，并能夠保持原有的空間結(jié)構(gòu)和生物活性而受到廣泛關(guān)注。表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)是較早發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)抗原，上皮來(lái)源的惡性腫瘤有不同程度的高表達(dá)，利用單克隆抗體治療EGFR陽(yáng)性表達(dá)的惡性腫瘤已取得一定的進(jìn)展，并進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)階段。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了EGFR為靶向的重組T7噬菌體載體疫苗，并進(jìn)一步探討在體的免疫活

2、性以及抗腫瘤作用。 經(jīng)實(shí)驗(yàn)得出如下結(jié)論: ①應(yīng)用RT-PCR技術(shù)從A549細(xì)胞中克隆了EGFR蛋白膜外的DNA片段。 ②構(gòu)建pMD18-T重組載體，重組質(zhì)粒DNA測(cè)序鑒定正確。 ③根據(jù)T7噬菌體載體臂的限制性酶切位點(diǎn)，把含相同的限制性酶切位點(diǎn)的亞克隆目的DNA片段直接插入表達(dá)載體，構(gòu)建的重組T7噬菌體表達(dá)的融合蛋白質(zhì)，能識(shí)別人EGFR多克隆抗體，保持了原有的功能活性。 ④利用構(gòu)建的重組T7噬菌體疫

3、苗免疫動(dòng)物，在動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)了體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)；免疫鼠的血清不僅可以識(shí)別提取的人EGFR蛋白，而且可以識(shí)別A431細(xì)胞上的保持空間結(jié)構(gòu)的EGFR蛋白；體外檢測(cè)CTL反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)組二個(gè)高拷貝數(shù)重組T7噬菌體均產(chǎn)生了CTL反應(yīng)活性，在倒置顯微鏡下，可見(jiàn)A431細(xì)胞周?chē)罅科⒓?xì)胞聚集，其中T7415-1b-132殺傷活性最高。針對(duì)該片段的誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異性抗體和細(xì)胞毒性反應(yīng)為最強(qiáng)。 ⑤異源相同蛋白可能在抗腫瘤疫苗研究中發(fā)揮重要作用