TIPE2在哮喘兒童外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:
　　兒童哮喘是一種小氣道的慢性炎癥，有多種細(xì)胞發(fā)揮了重要作用，尤其是T淋巴細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及上皮細(xì)胞等。氣道炎癥導(dǎo)致氣流受阻、支氣管高反應(yīng)性并誘發(fā)多種反復(fù)出現(xiàn)的癥狀。氣道炎癥的發(fā)展和調(diào)節(jié)與Th2細(xì)胞因子升高和Th1細(xì)胞因子降低密切相關(guān)。Th2細(xì)胞因子升高導(dǎo)致IgE過(guò)度產(chǎn)生，嗜酸性粒細(xì)胞分化與氣道高反應(yīng)性持續(xù)發(fā)展。然而Th1細(xì)胞因子可以對(duì)抗Th2細(xì)胞因子的作用，因此哮喘的氣道炎癥可能是Th

2、細(xì)胞失去正常平衡的結(jié)果，Th1/Th2平衡在哮喘的病理生理過(guò)程中扮演關(guān)鍵性的角色。
　　TIPE2是一種新型的負(fù)性免疫調(diào)節(jié)蛋白，已有研究證實(shí)其在機(jī)體固有免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)中均發(fā)揮重要的負(fù)性調(diào)節(jié)作用。有報(bào)道顯示，系統(tǒng)性紅斑狼瘡與慢性乙型肝炎患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞中以及在糖尿病患者的腎活檢組織中存在TIPE2的異常表達(dá)，這些結(jié)果表明TIPE2可能與一些慢性炎癥性疾病的發(fā)展有相關(guān)性。然而，TIPE2在兒童哮喘患者中的表達(dá)情況及其意義目

3、前尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究擬通過(guò)檢測(cè)兒童哮喘患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中TIPE2的表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)外周血中嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)目以及血清中IgE含量、Th1型細(xì)胞因子IFN-γ與Th2型細(xì)胞因子IL-4水平，并分析它們之間的相關(guān)性，了解TIPE2在哮喘發(fā)病過(guò)程中的作用，以探討哮喘發(fā)病起始階段的干預(yù)機(jī)制。
　　方法:
　　2011年至2012年隨機(jī)抽取在山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院就診的42名哮喘兒童為研究對(duì)象，診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2008年中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒童分

4、會(huì)呼吸學(xué)組修訂的兒童哮喘防治常規(guī)診斷標(biāo)準(zhǔn)。健康對(duì)照組隨機(jī)抽取同時(shí)期39名來(lái)自山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院入托查體兒童，排除哮喘、其他過(guò)敏疾病及近期呼吸道疾病。
　　1.采用RT-PCR、qRT-PCR及westernblot法檢測(cè)哮喘患者與正常對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞中TIPE2的表達(dá)水平;
　　2.采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法（即夾心ELISA法）檢測(cè)哮喘患者與正常對(duì)照組血清中IL-4、IFN-γ含量;
　　3.采用全自動(dòng)特定蛋白

5、分析儀檢測(cè)哮喘患者與正常對(duì)照組血清中總IgE含量;
　　4.采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀對(duì)哮喘患者及正常對(duì)照組全血中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)。
　　5.所有數(shù)據(jù)以平均值±均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)的形式表示，利用t檢驗(yàn)比較哮喘患者與正常對(duì)照組之間的差異，采用Pearson's相關(guān)性檢驗(yàn)分析的方法進(jìn)行相關(guān)性分析，以P＜0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性的意義。
　　結(jié)果:
　　1.外周血單個(gè)核細(xì)胞中TIPE2mRNA的表達(dá):半

6、定量RT-PCR顯示哮喘兒童組TIPE2mRNA表達(dá)水平較正常對(duì)照組低;實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果為，哮喘組為56.41±34.45，對(duì)照組為66.63±37.84，哮喘兒童組TIPE2mRNA的表達(dá)水平顯著降低(P=0.0323)。
　　2.外周血單個(gè)核細(xì)胞中TIPE2蛋白的表達(dá):Westernblot對(duì)42名哮喘兒童與39名健康對(duì)照兒童外周血TIPE2蛋白表達(dá)水平進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)哮喘兒童TIPE2蛋白表達(dá)水平比正常對(duì)照組低，與TIP

7、E2mRNA水平變化一致。
　　3.血清IFN-γ水平檢測(cè):哮喘組為150.64±123.019pg/ml，對(duì)照組為404.83±405.20pg/ml，哮喘兒童血清IFN-γ水平顯著降低(P＜0.001)。
　　4.血清IL-4水平檢測(cè):哮喘組IL-4為2.30±4.65pg/ml，對(duì)照組IL-4為0.37±0.70pg/ml，哮喘兒童血清中IL-4水平顯著增高(P＜0.001)。
　　5.血清中總IgE含量:哮喘組

8、為388.87±364.51U/ml，對(duì)照組為20.61±4.84U/ml，哮喘兒童血清總IgE含量明顯增高(P＜0.001)。
　　6.外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù):哮喘組為0.30±0.26×109/L，對(duì)照組為0.16±0.09×109/L，哮喘兒童外周血嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量顯著增高(P=0.0017)。
　　7.相關(guān)性分析:TIPE2mRNA的表達(dá)與血清IL-4(r=0.3693，P=0.0344)，血清總IgE（r=_0.5

9、173，P=0.001）及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(r=0.3503，P=0.0362)呈負(fù)相關(guān)。然而，在TIPE2mRNA表達(dá)與血清IFN-γ之間(r=0.1504，P=0.3959)無(wú)明顯相關(guān)性。
　　結(jié)論:
　　1.哮喘兒童外周血嗜酸性粒細(xì)胞、血清總IgE、血清IL-4水平顯著增高，而IFN-γ水平則顯著降低，這表明在哮喘兒童中Th2功能占據(jù)優(yōu)勢(shì)。
　　2.與健康兒童相比，哮喘患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞TIPE2mRNA及蛋白