一株產(chǎn)堿性磷酸酶菌株的分離鑒定及發(fā)酵條件研究.pdf

1、堿性磷酸酶(Alkal ine phosphatase，EC3.1.3.1，簡稱ALP)是一種底物專一性較低的、裂解有機磷化合物釋放無機磷的磷酸單脂酶。堿性磷酸酶在酶聯(lián)免疫測定、生物傳感器、非同位素探針、雜交和測序方面有廣泛應用。在分子生物學方面，堿性磷酸酶分解核酸的末端磷酸鹽，是遺傳工程的有用工具酶。堿性磷酸酶還在有機磷農(nóng)藥降解中起到非常重要的作用。 堿性磷酸酶主要存在于人體、動物、植物和微生物中。目前商業(yè)堿性磷酸酶大多產(chǎn)自動

2、物體(小牛腸堿性磷酸酶)或植物體(麥芽)，產(chǎn)率低，價格昂貴；有些熱穩(wěn)定性差，使它的使用受到了限制。為了獲得具有自主產(chǎn)權的產(chǎn)率高、熱穩(wěn)定性好的堿性磷酸酶，本研究從32株細菌中分離篩選到一株熱穩(wěn)定性較好的產(chǎn)堿性磷酸酶的菌株HB1，對其進行了鑒定，并進一步研究了該菌株的產(chǎn)酶條件，主要實驗結果如下： 1.產(chǎn)堿性磷酸酶茵株的分離、篩選從土壤分離的(12株)和浙江大學應用微生物學研究室已有保存菌株(20株)共32株菌中用微孔板法初篩，獲得三

3、株堿性磷酸酶活性較高的菌株HB1、1靜、B7。磷酸苯二納法測酶活復篩后確定菌株HBI產(chǎn)酶活性最高。該菌株主要產(chǎn)胞外堿性磷酸酶，并發(fā)現(xiàn)該酶具有較好的熱穩(wěn)定性。 2.產(chǎn)酶菌株的鑒定通過對菌株HB1的形態(tài)學觀察，生理生化特性測定，DNA中G+C mol％含量，16S rDNA測序和比對分析，確定菌株HBI屬于芽胞桿菌屬(Bacilus.sp)的一個種。 3.菌株HB1產(chǎn)酶發(fā)酵條件的優(yōu)化用搖瓶批量發(fā)酵法測得HB1發(fā)酵的最佳培養(yǎng)基