單核細胞化絲素支架對平滑肌細胞生物學行為的影響.pdf

1、目前許多研究證明組織工程血管支架在體內的再造機制是一種炎癥反應介導的血管重塑過程，炎癥反應是宿主對損傷和異物產(chǎn)生的一種正常的應答機制，其強度和持久性對材料在體內的穩(wěn)定性和生物相容性產(chǎn)生影響。單核/巨噬細胞是調節(jié)炎癥反應的重要細胞，可以通過細胞間直接接觸或旁分泌途徑對血管重要組分平滑肌細胞的生物學行為產(chǎn)生影響。
　　為了研究單核/巨噬細胞在體內和體外對血管平滑肌生物學行為的影響，以便進一步更好地調控組織工程血管支架移植后單核/巨噬細

2、胞及平滑肌細胞的浸潤和功能表型，本文首先采用冷凍干燥法制備絲素蛋白支架，這種方法制備的支架具有可控的孔徑連通度，良好的細胞相容性，然后分別從絲素支架的體外細胞培養(yǎng)和體內皮下埋植兩方面進行研究。
　　首先體外細胞培養(yǎng)部分，通過在絲素支架上種植外周血來源的單核細胞，考察血管平滑肌細胞在單核細胞化的絲素支架上遷移、增殖及收縮表型的改變。利用掃描電鏡(SEM)觀察單核細胞在絲素材料上的表面形貌，并對DiI標記的平滑肌進行熒光拍照，觀察共培

3、養(yǎng)條件下平滑肌向支架內的遷移情況。旁分泌途徑中，通過MTT實驗、Transwell實驗、qPCR觀察單核細胞化絲素支架下的條件培養(yǎng)基對平滑肌細胞增殖、遷移及SM22基因表達情況的影響。結果顯示，單核細胞的種植促進了平滑肌細胞在絲素支架材料內的遷移、粘附和增殖，并且絲素支架微環(huán)境下的單核細胞更有利于血管平滑肌維持收縮表型。
　　對于單核細胞化絲素支架在體內的研究，首先利用H&E染色對材料的細胞化進行評價，然后通過免疫熒光染色對平滑肌

4、(α-SMA)進行定量分析，結果發(fā)現(xiàn)單核細胞的種植在一定程度上減少了大鼠體內平滑肌細胞的浸潤，與體外細胞實驗結果相反。為進一步考察這一現(xiàn)象出現(xiàn)的原因，我們利用免疫熒光染色技術對大鼠內源性的巨噬細胞(CD68)及其兩種分型M1、M2進行定量考察，結果發(fā)現(xiàn)，種植的外源性單核細胞在皮下埋植后逐漸消失并伴隨大鼠內源性巨噬細胞浸潤地明顯減少，表明單核細胞的種植在一定程度上減輕了材料在體內的炎癥反應，降低了內源性巨噬細胞的遷移和浸潤程度。并且通過熒