不同fimA型牙齦卟啉單胞菌菌毛蛋白對(duì)人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：分析比較Ⅰ、Ⅱ fimA型牙齦卟啉單胞菌菌毛蛋白(P.gingivalis-rFimA)對(duì)人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（HUASMCs）的增殖、遷移能力以及表型轉(zhuǎn)化的影響，探討不同fimA型P.gingivalis-rFimA的侵襲在動(dòng)脈粥樣硬化（As）發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用。
　　方法：1、體外培養(yǎng)的HUASMCs，加入96孔培養(yǎng)板，采用CCK-8檢測不同終濃度的P.gingivalis-rFimA(0.5μg/ml、1μg/ml

2、、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)在2h、8h、24h、48h對(duì)平滑肌細(xì)胞增殖的影響，酶標(biāo)儀450nm處測定各組OD值，并確定rFimA促增殖效應(yīng)的最適濃度。2.采用上述確定最適濃度10μg/ml的P.gingivalis-rFimA，與HUASMCs共培養(yǎng)2h、8h、24h、48h后，通過Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測HUASMCs的遷移情況，透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，流式細(xì)胞術(shù)檢測收縮型標(biāo)志蛋白平滑肌肌球蛋白重鏈（s

3、mooth muscle myosin heavy chain, SM-MHC）和合成型標(biāo)志細(xì)胞視黃醇結(jié)合蛋白-1（cellular retinol bindingprotein-1, CRBP-1）的表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果：1、在不同時(shí)間點(diǎn)，Ⅰ型和Ⅱ型P.gingivalis-rFimA組的促HUASMCs增殖作用均比陰性對(duì)照組強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。隨著濃度的增加Ⅰ型和Ⅱ型P.gingivalis-rFimA組

4、的促HUASMCs增殖作用也增強(qiáng)（P<0.05）。在同一刺激濃度和作用時(shí)間點(diǎn)，Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激HUASMCs增殖作用強(qiáng)于Ⅰ型P.gingivalis-rFimA(P<0.05)。
　　2、在不同時(shí)間點(diǎn)，Ⅰ和Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激組的HUASMCs遷移細(xì)胞數(shù)目均比陰性對(duì)照組多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。隨著時(shí)間延長，各組的HUASMCs遷移細(xì)胞數(shù)目增多；2

5、h時(shí)，ⅡfimA型P.gingivalis-rFimA刺激組的HUASMCs遷移細(xì)胞數(shù)目要多于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；在8h、24h和48h時(shí)，Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激組的HUASMCs遷移細(xì)胞數(shù)目要多于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3、通過電鏡觀察，在Ⅰ、Ⅱ fimA型

6、P.gingivalis-rFimA刺激組2h、8h時(shí)HUASMCs出現(xiàn)明顯的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、糖原、線粒體、吞噬體和溶酶體的增多，細(xì)胞器有不同程度的腫脹；ⅠfimA型P.gingivalis-rFimA刺激組在各個(gè)觀察點(diǎn)均可觀察到脂滴的出現(xiàn)；Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激組則在24h和48h時(shí)，細(xì)胞器開始溶解、大部分細(xì)胞結(jié)構(gòu)出現(xiàn)破壞。
　　4、在不同時(shí)間點(diǎn)，Ⅰ和Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA

7、刺激后，均能觀察到HUASMCs的合成型標(biāo)志分子CRBP-1的表達(dá)上調(diào)，收縮型標(biāo)志分子SM-MHC的表達(dá)下調(diào)，而Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA組上調(diào)CRBP-1表達(dá)的作用強(qiáng)于于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA組，在24h和48hⅡ fimA型P.gingivalis-rFimA組下調(diào)SM-MHC表達(dá)的作用強(qiáng)于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：Ⅰ、