兩親性肽自組裝凝膠體外誘導神經(jīng)干細胞的研究.pdf

1、目的： 設計含活性配體的兩親性肽，在含神經(jīng)干細胞（neural stem cells NSCs）的DMEM/F12溶液觸發(fā)下自組裝成凝膠，研究其對NSCs生長及分化的影響。 方法： 取小鼠乳鼠大腦皮質，機械分離，無血清培養(yǎng)，獲得具有自我增殖能力的NSCs，免疫組織化學鑒定。實驗組（EG）：分a1、a2、A1、A2亞組及b1、b2、B1、B2亞組，a1、a2、A1、A2亞組將1％質量分數(shù)（wt）肽加入含細胞的等體積

2、的DMEM/F12液中，構建三維肽凝膠培養(yǎng)體系；b1、b2、B1、B2亞組將NSCs接種子二維肽凝膠表面；對照組（CG）：分c1、c2及C1、C2亞組，細胞接種于多聚賴氨酸表面，進行培養(yǎng)，免疫細胞化學染色，激光共聚焦顯微鏡（Laser Confocal Microscopy，LCM）及倒置相差顯微鏡（Inverted phase contrast microscope，IPCM）觀察細胞的生長及分化情況，CCK-8酶標法檢測并繪制細胞生

3、長曲線，透射電子顯微鏡（Transmission Electron Microscope，TEM）檢測肽凝膠及細胞在凝膠中的超微結構。 結果： 免疫細胞化學染色鑒定：培養(yǎng)的細胞為NSCs，Nestin標記陽性。IPCM觀察：EG中，NSCs在肽凝膠表面及內部，培養(yǎng)2天形成細胞球，7天后形成神經(jīng)元樣形態(tài)；CG中，c1亞組僅形成細胞球，c2亞組細胞可形成神經(jīng)元形態(tài)。LCM觀察，EG中，NSCs分化為神經(jīng)元與星形膠質細胞，NF

4、標記陽性，GFAP標記陽性：CG：c1亞組可見NSCs球，Nestin標記陽性，c2亞組為神經(jīng)元與星形膠質細胞，NF標記陽性，GFAP標記陽性。CCK-8酶標法顯示：培養(yǎng)的第3-7天三維肽凝膠培養(yǎng)體系細胞增殖活力明顯高于二維培養(yǎng)體系，且有顯著性差異（p<0.05），A1、A2亞組間無顯著性差異（p>0.05）；培養(yǎng)的第3-7天二維肽凝膠培養(yǎng)組（B1、B2亞組）及對照組C2亞組細胞增殖略高于C1亞組，無統(tǒng)計學差異（P>0.05）；B1、B