外源性瘦素對急性胰腺炎肝損傷的作用機制研究.pdf

1、目的:通過檢測外源性瘦素(Leptin)對重癥急性胰腺炎(severe acutepancreatitis; SAP)模型大鼠的肝細胞凋亡指數(shù)、肝組織NF-kappaB(unclearfactor-kappa B;NF-κB)的表達的影響，以及瘦素干預后的大鼠血清腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor;TNF-α）、谷草轉氨酶(Aspertateaminotransferase，AST)、谷丙轉氨酶(Alanine

2、 aminotransferase，ALT)、血清淀粉酶（Amylase，AMY）的表達水平變化，探討外源性瘦素對重癥急性胰腺炎大鼠模型的肝損傷的作用機制。
　　方法:30只雄性SD大鼠，體重在250g-300g之間，隨機分為三組:假手術組、重癥急性胰腺炎模型組(SAP組)、重癥急性胰腺炎瘦素治療組（leptin組）。在麻醉顯效開腹后只翻動十二指腸、胰腺及其周圍組織制作假手術組動物模型。SAP組及瘦素組大鼠開腹后將3.5％的?；悄?/p>

3、酸鈉（按照1ml/kg劑量，0.2ml/min的速度）緩慢逆行注入胰膽管中，制作SAP模型。瘦素組大鼠在關腹前給予瘦素20μg/kg腹腔注射。于假手術組和SAP組大鼠腹腔內注射與瘦素組大鼠同等劑量的生理鹽水后關腹。術后各組大鼠禁食但自由飲水。術后12時處死各組大鼠，并對各組大鼠的胰腺及肝臟組織進行大體標本的觀察，將肝臟組織及胰腺組織進行HE染色觀察，并將肝臟HE圖片進行光鏡下的病理學評分，免疫組化染色法檢測肝組織NF-κB的表達。抽取下

4、腔靜脈血提取血清，血清ALT、AST、AMY水平采用全自動生化儀進行檢測。各實驗組大鼠血清TNF-α水平采用酶聯(lián)免疫測定法(ELISA)檢測。采用細胞凋亡原位標記(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labelingTUNEL)法測定肝臟組織的細胞凋亡指數(shù)。以上所有的檢測結果均采用SPSS12.0軟件進行統(tǒng)計學數(shù)據(jù)分析。
　　結果:1、各實驗組大

5、鼠死亡情況，假手術組在十二小時剖殺時無大鼠死亡。SAP組大鼠死亡3只。瘦素干預組大鼠死亡1只。2、各實驗組腹腔內外觀變化:(1)假手術組大鼠腹腔內未見到腹水，胰腺及肝臟組織大體標本未見到明顯的形態(tài)學改變，腹腔內無皂化斑塊形成，腸腔無積氣。(2) SAP組胰腺組織外觀呈極度水腫的灰白色，可見周圍的胰腺組織壞死、出血，胰腺周圍及腹腔脂肪壞死明顯，組織彈性明顯下降，與周圍肝臟、腸管、腹壁等組織廣泛粘連。肝臟組織包膜張力增高，組織脆性增加，觸之

6、易破裂，體積稍增大，表面呈暗黑紅色，與胰腺組織部分粘連，粘連處包膜下可見點狀出血。腹腔內較多黃紅色腹水形成，腸腔廣泛積氣明顯，部分模型胃極度擴張，其內可見較多食物潴留，腸系膜及后腹壁均可見較多皂化斑塊附著。(3)瘦素組胰腺組織呈灰白色，與周圍組織部分粘連，可見少量出血，周圍脂肪組織壞死較SAP組明顯減少，胰腺周圍皂化斑塊減少，腸系膜及腹腔未見到皂化斑塊。肝臟組織體積無明顯變化，顏色暗紅、均勻，未見到出血點，與胰腺組織無明顯粘連。腹腔內可

7、見少量的淡黃色腹水，部分腸腔輕度積氣，無明顯胃潴留。3、各實驗組胰腺組織光鏡下改變:(1)假手術組胰腺組織光鏡下HE染色后觀察，可見光鏡下胰腺組織結構完整，未見壞死灶，葉間隔及細胞間隙未見水腫、出血及炎癥細胞浸潤。(2) SAP組鏡下可見大量炎癥細胞浸潤胰腺組織，明顯增寬的胰腺葉間隔、小葉間隔及胰腺腺泡間隔，腫脹的胰腺腺泡細胞。大片胰腺組織出血、壞死、小葉結構紊亂，部分胰腺小葉結構消失?？稍诓糠中∪~壞死區(qū)內見到鈣化灶。(3)瘦素組:部分

8、胰腺小葉可見結構紊亂，間質內可見少量的炎細胞浸潤，胰腺腺泡細胞腫脹，并可見胰腺組織存在著不同程度的出血、壞死等病理改變。與SAP組相比較，瘦素組胰腺組織壞死、出血程度及炎癥細胞浸潤數(shù)量均有減少，且壞死灶內未見鈣化灶。4、肝臟病理學改變:(1)假手術組肝臟組織肝細胞排列整齊，細胞無水腫，細胞間隙無增寬，未見到細胞壞死及凋亡。組織間無炎癥細胞浸潤。(2) SAP組可見肝細胞水腫，細胞間隙增寬，可見較多細胞嗜酸性變，可見細胞點狀壞死，組織間可

9、見紅細胞浸潤，肝竇及匯管區(qū)可見較多量的紅細胞堆積和炎癥細胞浸潤。(3)瘦素組肝細胞輕度水腫，細胞間隙稍增寬，可見少量嗜酸性變細胞，未見到明顯的肝細胞壞死，匯管區(qū)及肝竇炎癥細胞數(shù)較SAP組明顯減少。組織間未見到紅細胞。5、肝細胞凋亡指數(shù)、肝組織NF-κB的表達SAP組與瘦素組均較假手術組增高(P＜0.05)，瘦素組較SAP組降低(P＜0.05)。血清AMY、AST、ALT、TNF-α值瘦素組較SAP組降低(P＜0.05)，SAP組較假手術

10、組增高(P＜0.05)。
　　結論:1、外源性瘦素對急性胰腺炎的肝損傷起保護作用，可能通過抑制炎癥反應，減輕肝細胞的凋亡程度，可能為臨床治療重癥急性胰腺炎肝損傷提供新的途徑。2、TNF-α在重癥急性胰腺炎的肝損傷的發(fā)生及病情的演變過程中起了重要作用，通過抑制TNF-α的活化可減輕個體因炎癥反應而導致的組織損傷。3、肝細胞的凋亡在SAP肝損傷中起了重要作用，外源性瘦素可能通過抑制NF-κB的表達而減輕肝細胞的凋亡程度，從而達到保護肝