白術ISSR與質量研究.pdf

1、目的:摸索適合白術基因組DNA提取方法，篩選白術ISSR引物，建立ISSR-PCR反應體系，檢測白術ISSR分子標記，分析不同產地白術的遺傳關系與白術多糖含量指標的變化情況，從而為白術的遺傳育種，品種改良提供科學參考。
　　方法：采用改良CTAB法和常規(guī)SDS法兩種方法對比提取白術基因組DNA，運用單因素影響試驗建立ISSR-PCR反映體系，通過NTSYS-pc version-2.11f計算機軟件構建聚類樹狀圖，結合紫外分光法檢

2、測白術多糖含量，對8個產地的白術（陜西延安，西安，四川，安徽，浙江，湖南懷化，貴陽，貴州銅仁）遺傳關系和質量進行分析研究。
　　結果:1.本實驗通過不同水浴時間,不同的CTAB與SDS濃度，不同的離心轉速對基因組 DNA提取進行了分析，從而獲得了最適合白術的ISSR-PCR反應體系為改良CTAB法提取基因組DNA。其OD值在1.8～1.9范圍內，表明其為高純度的DNA。
　　2.通過紫外分光光度法，檢測多糖的吸收峰為490n

3、m，建立標準曲線.測定樣品吸光度，計算白術多糖含量分布在6.37％～32.6%之間，顯示出8個產地白術之間的多糖含量差異較大。
　　3.采用優(yōu)化的白術ISSR-PCR的最佳反應體系從菊科中的眾多引物中篩選出3條用于指紋圖譜構建的引物：ISSR-18、ISSR-24、ISSR-36。計算每個引物的條帶數，從而獲得白術居群的相似系數。用 NTSYS-pc version-2.11f軟件計算任意樣品間的遺傳相似度、遺傳距離，構建聚類圖。