骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)潰瘍性結(jié)腸炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：制作大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型；分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增、熒光標(biāo)記大鼠BMSCs，觀察其生物學(xué)特性；觀察標(biāo)記的同種異體BMSCs經(jīng)靜脈移植后不同時(shí)間在UC及正常大鼠主要器官、消化道各段的分布情況，為BMSCs在消化管組織工程以及腸黏膜損傷性疾病治療研究中的應(yīng)用，提供基礎(chǔ)理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：SD大鼠64只，隨機(jī)分為：I組(免疫+TNBS/乙醇)和II組(TNBS/乙醇)各24只，Ⅲ組(乙醇)12只，Ⅳ組(生理鹽水)4只。參照文獻(xiàn)制作模

2、型，于造模后第1、21天，第8周、12周處死大鼠，剖取全部結(jié)腸及回腸末段觀察；取4-6周SD大鼠的股骨、脛骨骨髓，分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增獲取BMSCs。檢測(cè)BMSCs的貼壁率、生長(zhǎng)曲線；流式細(xì)胞儀檢測(cè)第3和第5代(P3和P5)BMSCs表達(dá)CD44、CD45和CD90的情況，以及細(xì)胞周期分析。 結(jié)果：肉眼及光鏡顯示：Ⅰ、Ⅱ組均出現(xiàn)糜爛、潰瘍等典型UC結(jié)腸病變，Ⅰ組還伴有末段回腸病變；Ⅰ組的病變可維持8周，Ⅱ組病變3周后趨向愈合。Ⅲ組病

3、變僅黏膜充血水腫和少量糜爛或淺表潰瘍，第21天痊愈。Ⅳ組未見組織損傷；免疫組織化學(xué)染色結(jié)果經(jīng)圖象分析顯示：成模期內(nèi)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組結(jié)腸黏膜TNF-α表達(dá)高于正常對(duì)照的Ⅳ組，IL-10低于正常對(duì)照的Ⅳ組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論：⑴3種UC大鼠模型中，以免疫復(fù)合法所建模型為較理想的UC動(dòng)物模型；⑵用貼壁篩選法，成功分離得到大鼠BMSCs，流式細(xì)胞儀分析培養(yǎng)P3、P5 BMSCs具有MSCs的表面標(biāo)記特征，也具有干細(xì)胞

4、的細(xì)胞周期特點(diǎn)；傳代BMSCs的生長(zhǎng)較原代細(xì)胞快，在含10％FBS的DMEM-F12培養(yǎng)基中每傳代一次，細(xì)胞增加約2.2倍；凍存對(duì)BMSCs的生長(zhǎng)無明顯影響；P6 BMSCs出現(xiàn)衰老征象；⑶Hoechst33342熒光標(biāo)記BMSCs是短期示蹤細(xì)胞的有效手段；⑷移植的BMSCs在體內(nèi)廣泛分布，在7d的肺14d的骨髓中含量略高于肝和脾，提示移植14d時(shí)，多數(shù)干細(xì)胞仍在血循環(huán)中；⑸移植的BMSCs 3d即可遷移至結(jié)腸，多定居于黏膜層。移植后1

5、4d病變結(jié)腸BMSCs較其余消化道、以及正常結(jié)腸多，病變結(jié)腸黏膜層BMSCs較正常結(jié)腸黏膜多，提示BMSCs可向損傷組織定向遷移；⑹移植BMSCs后14d，移植組結(jié)腸黏膜損傷修復(fù)程度明顯優(yōu)于非移植組，提示BMSCs移植可修復(fù)或促進(jìn)損傷結(jié)腸組織修復(fù)；⑺BMSCs移植UC大鼠IL-10表達(dá)增高而TNF-α表達(dá)降低，表明移植的BMSCs可能通過調(diào)節(jié)腸道TNF-α、IL-10等炎癥細(xì)胞因子達(dá)到免疫平衡來修復(fù)UC結(jié)腸病灶；⑻BMSCs移植組與BM