FHL2基因在大腸癌發(fā)生與去分化中的作用.pdf

1、第一軍醫(yī)大學2003級碩士學位論文FIE2基因在大腸癌發(fā)生與去分化中的作用EffectivenessofFHL2genesinhumanColorectalCancergenesisanddedifferentiation課題來源：自選課題專業(yè)名’稱學位申請人指導教師內(nèi)科學(消化系病)楊洲王繼德副教授張亞歷教授答辯委員會主席陳曼湖教授答辯委員會成員張世能副教授文卓夫教授周杰教授張振書教授論文評閱人曾志榮副教授吳承堂副教授2006年5月1

2、0日廣州中文摘要blotting檢測結(jié)腸癌組織和癌旁組織中FHL2蛋白的表達。2、抑制FHL2基因?qū)Υ竽c癌細胞分化的影響：(1)用Westernblotting檢測不同大腸癌細胞株SW620、SW1I16、SW480、DLDI、HCTl5、HT29、LoVo和Coi0205中FHL2蛋白的基礎(chǔ)表達：(2)建立穩(wěn)定表達空載體LoVo細胞系(LoVo／Vector)和穩(wěn)定表達FHL2反義基因LOVo細胞系(LoVo／FHL2AS)并鑒定；(

3、3)用相差顯微鏡觀察LoVo／Vector和LoVo／FHL2ASl細胞形態(tài)學上的表現(xiàn)；(4)經(jīng)n一微管蛋白抗體和Hochest22358分別標記細胞漿和細胞核，用免疫熒光顯微鏡觀察LoVoNector和LoVo／FHL2ASI細胞骨架與細胞核的變化：(5)用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(盯pCR)檢測LoVo／Vector、LoVo柵，2一ASI和LoVo／FHL2一AS2中細胞分化指標癌胚抗原(CEA)和上皮細胞鈣粘蛋白(E—Cadheri

4、n)的表達；(6)經(jīng)羅丹明毒肽標記LoVoNector和LoVo／FHL2一ASI細胞中的絲狀肌動蛋白(F—actin)，用免疫熒光顯微鏡觀察其細胞核和絲狀肌動蛋白的形態(tài)變化：(7)用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(RTPCR)檢測LoVo／Vector、LoVo／FHI_2一ASI和LoVoq：lH_2一AS2，觀察大腸癌相關(guān)癌基因存活素(survivin)，環(huán)氧化酶；2(cox一2)，人端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)和cqunmRNA的表達：(8

5、)經(jīng)不同濃度的小牛血清(FBS)培養(yǎng)的LoVo／Vector、LoVo／FHL2ASl和LoVo／FHL2一AS2細胞，用噻唑藍(M丌)法測定其對血清的增殖反應。結(jié)果用SPSS120統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，采用秩和檢驗，并進行兩兩比較，P005表明有統(tǒng)計學意義。結(jié)果：l、臨床標本中FHL2蛋白的表達檢測：(1)用免疫組織化學法檢測FHL2蛋白的表達，F(xiàn)HL2蛋白主要定位于細胞核，細胞質(zhì)有少許表達正常大腸粘膜組織中不表達或低表達，而在大腸癌

6、組織中表達水平較高，F(xiàn)HL2蛋白表達水平與大腸癌分化程度負相關(guān)，分化程度越低其表達程度越高；(2)Westernblotting發(fā)現(xiàn)FHL2在結(jié)腸癌組織中高表達，而在結(jié)腸癌旁組織中不表達或低表達。2、抑制FHL2基因?qū)Υ竽c癌分化影響的體外細胞實驗：(1)腸癌緬胞株SW620、SWlll6、Sw480、DLDI、HCTl5、HT29、LoVo、Col0205均表達相當量的FHL2蛋白，而在部分分化的HT29細胞幾乎不表達；(2)成功建立了