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文檔簡介
1、宮頸癌是婦科常見腫瘤之一,細(xì)胞周期失調(diào)被認(rèn)為在宮頸癌的形成過程中發(fā)揮了重要作用。p16是一種抑癌基因。p16蛋白在細(xì)胞周期中通過抑制CDK4/6與cyclinD的結(jié)合而起著負(fù)調(diào)控的作用。研究表明宮頸癌細(xì)胞中的p16表達(dá)異常,但文獻(xiàn)報道的結(jié)果并不一致,且其在宮頸癌發(fā)生過程中的作用也不清楚。因此,本實(shí)驗(yàn)的目的是觀察并進(jìn)一步明確p16在宮頸浸潤癌及其前期病變中的表達(dá)狀況和趨勢,探討其在宮頸癌早期診斷中的應(yīng)用價值,研究高表達(dá)的p16在宮頸鱗狀上
2、皮細(xì)胞癌中所起的作用,探討p16在宮頸鱗狀細(xì)胞上皮癌中高表達(dá)的機(jī)制,為p16在宮頸癌生物選擇性治療中的應(yīng)用提供依據(jù)。 [方法]采用SP免疫組化法檢測來自石蠟切片、冰凍切片、和細(xì)胞涂片的宮頸標(biāo)本的p16表達(dá)情況。石蠟標(biāo)本包括宮頸炎19例,低度上皮內(nèi)瘤變(CervicalIntraepithelialNeoplasia,CINⅠ)15例,高度CIN(CINⅡ、Ⅲ)42例,癌旁CIN16例,浸潤癌66例。新鮮冰凍標(biāo)本包括宮頸炎10例,
3、浸潤癌20例。涂片標(biāo)本包括5例宮頸細(xì)胞涂片。按細(xì)胞著色情況將浸潤癌中陽性病例分為p16低表達(dá)組、p16高表達(dá)組。用SP免疫組化法分別檢測兩組中總體pRb(包括未磷酸化、低磷酸化、高磷酸化)的表達(dá)情況,及代表pRb磷酸化水平的bcl-2、p73的表達(dá)情況;根據(jù)冰凍切片免疫組化著色情況,選取p16低表達(dá)、高表達(dá)病例,用western-blot檢測新鮮組織中p16總蛋白表達(dá)量,免疫共沉淀方法檢測組織中p16與CDK4的結(jié)合情況,及與CDK4結(jié)
4、合的p16蛋白量。然后計(jì)算p16低表達(dá),p16高表達(dá)病例中p16與CDK4的結(jié)合率,并比較p16功能的改變。作為研究p16高表達(dá)機(jī)制的對照,用SP免疫組化檢測5例視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤10例乳腺癌及癌旁正常組織石蠟切片中p16的表達(dá)情況。隨機(jī)抽取27例宮頸石蠟標(biāo)本,用顯微切割的方法切取宮頸石蠟切片中的病變組織,用PCR方法檢測其中高危型HPV的感染情況。 [結(jié)果]免疫組化結(jié)果:按上述病例標(biāo)本順序(依次是宮頸炎、低度CIN、高度CIN、癌
5、旁CIN、浸潤癌),石蠟標(biāo)本中p16表達(dá)陽性率分別是0(0/19),40%(6/15),78.6%(33/42),81.3%(13/16),92.4%(61/66),除癌旁CINp16陽性表達(dá)率與浸潤癌組的p16表達(dá)率差別無顯著性外(χ2檢驗(yàn),P>0.05),其余各組的p16表達(dá)率均與浸潤癌組的p16表達(dá)率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2檢驗(yàn),P<0.05);冰凍切片中宮頸慢性炎組的p16表達(dá)陽性率為0(0/10)明顯低于浸潤癌組的90%(1
6、8/20)(Fisher確切概率法,P<0.001);宮頸涂片標(biāo)本,HE染色證實(shí)均有核異型細(xì)胞。各例中異型細(xì)胞p16免疫細(xì)胞化學(xué)染色均陽性。宮頸癌p16低表達(dá)組,p16高表達(dá)組中pRb陽性率分別為23.3%(7/30)、45.2%(14/31),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2檢驗(yàn),P>0.05);p16低表達(dá)組中bcl-2、p73陽性率分別為50%(15/30)、23.3%(7/30)低于p16高表達(dá)組的83.9%(26/31)、64.5%(2
7、0/31)(χ2檢驗(yàn),P<0.05);免疫共沉淀結(jié)果顯示,宮頸癌中p16與CDK4結(jié)合。通過western-blot檢測p16低表達(dá),p16高表達(dá)病例中p16與CDK4結(jié)合率分別為(88.5±1.9)%、(85.3±4.3)%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),P>0.05);p16、pRb在5例視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中皆無表達(dá),乳腺癌p16陽性率為50%(5/10),癌旁正常組織為20%(2/10),兩者之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2檢驗(yàn),P>0
8、.05)。PCRHPV檢測及分型結(jié)果:隨機(jī)抽取的宮頸石蠟切片中均有高危型HPV(HPV16、18)感染。 [結(jié)論](1)p16在宮頸浸潤癌及其前期病變細(xì)胞中表達(dá)增高。(2)由于p16免疫組化染色陽性不出現(xiàn)在宮頸正常上皮細(xì)胞,僅出現(xiàn)在上皮內(nèi)瘤變和浸潤癌細(xì)胞中,且宮頸涂片的核異型細(xì)胞均呈陽性表達(dá),提示p16免疫組化染色可作為一個宮頸癌及其前期病變的輔助病理診斷標(biāo)記。(3)高表達(dá)的p16在宮頸癌中仍能與cyclinD競爭結(jié)合CDK4,
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