下調(diào)PMS2基因后A2780細胞體外生物學(xué)功能的研究.pdf

1、目的：
　　建立錯配修復(fù)基因PMS2表達下調(diào)的卵巢癌A2780細胞株,體外研究該腫瘤細胞遷移、增殖及凋亡的變化。
　　方法：
　　選取卵巢癌A2780細胞株進行培養(yǎng),用siRNA下調(diào)PMS2的表達。實時熒光定量PCR法檢測轉(zhuǎn)染48h后PMS2mRNA的相對表達水平。免疫印跡法檢測轉(zhuǎn)染72h后PMS2蛋白的相對表達水平。Transwell遷移實驗和劃痕實驗研究PMS2表達下調(diào)后腫瘤細胞遷移能力的改變。臺盼藍拒染法檢測PM

2、S2表達下調(diào)后,腫瘤細胞增殖能力的變化。流式細胞術(shù)(FACS)分析PMS2表達下調(diào)對癌細胞凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　　1.siRNA可下調(diào)A2780細胞的PMS2表達
　　(1)RT-PCR法檢測出轉(zhuǎn)染siRNA后PMS2mRNA的相對表達量明顯下降。同空白組相比,轉(zhuǎn)染PMS2-homo-124,PMS2-homo-2190,PMS2-homo-236的mRNA相對表達量降低,其相對表達水平分別為(4.17±0.51

3、)％,(0.14±0.15)%,(10.67±4.30)%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。我們選擇轉(zhuǎn)染效率較高的質(zhì)粒PMS2-homo-124,PMS2-homo-2190進行后續(xù)實驗。
　　(2)免疫印跡法證明轉(zhuǎn)染后PMS2蛋白的相對表達量明顯下降。轉(zhuǎn)染72h后,PMS2-homo-124,PMS2-homo-2190的蛋白相對表達量分別為(0.73±0.47)、(2.19±0.42),明顯低于空白組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P

4、<0.05)。
　　2.PMS2表達下調(diào)后細胞遷移增加。Transwell遷移實驗可見:穿膜細胞PMS2-homo-124組(105.3±8.41)和PMS2-homo-2190組(126.62±34.59)比NC組(51.25±15.41)和空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(48.30±6.77)數(shù)量多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。劃痕實驗也可見:PMS2表達下調(diào)細胞遷移明顯比NC組及空白組多。
　　3.PMS2表達下調(diào)后細胞增殖能力增

5、強。臺盼藍拒染法證明:轉(zhuǎn)染48h后PMS2表達下調(diào)細胞增殖活力比NC組及空白組高。
　　4.PMS2表達下調(diào)后細胞凋亡率無明顯變化。轉(zhuǎn)染PMS2-homo-124和PMS2-homo-2190后癌細胞總凋亡率分別為(6.47±2.73)%和(5.47±2.13)%與NC組(5.9±1.8)%及空白組(5.33±2.57)%相比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),早期凋亡率也無明顯差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：