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1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文氯霉素酶聯(lián)免疫分析方法及試劑盒研究姓名:黃雅麗申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):農(nóng)藥學(xué)指導(dǎo)教師:朱國念李聰20050601氯霉素酶聯(lián)免疫分析方法及試劑盤研究ABSTRACTTwohaptens(CAPHSandCAPHS2)ofchloramphenicol(CAP)weresynthesizedbychemicalreactionbetweenCAPandsucciificanhydride,andidentifiedbyE
2、SIMSThen,twohaptenswerecovalentlyeoupledontobovineserumalbumin(BSAlwiththemodifiedactiveestermethod(cAPHSBSAandCAPHS2BSA)theratiosofconjunctionhaptensandBSAweredeterminedbyUVspectrometerTheanti—CAPHSlantibody(Ab0andanti—
3、CAP—HS2antibody(Ab2)wereobtainedbyimmanisingtheNewZealandwhiterabbitswithCAP—HSl—BSAandCAPHS2BSATitersofAblandAb2were839106and655104,respectiveIyIntermsoftheaffmityoftwoantibodiesbyELIS凡Ablwasbetter血anAb2Comparedwjthdiff
4、erentmethodsofcouplinghorseradishperoxidase(riPP)themodifiedmethodofsodiumperiodateWaSprovedtobemoreeffectivelytotagHRPonAbTheeffectsofvariousfactors,suchflSimmuneplate,coatingbuffercoatingtemperature,coatingtime,solvent
5、,ionicintensityandnon—specifieityadsorptionwerestudied,TheoptimumconditionforELISAwasgivenasfollowing:NUNcImmuneplatecoatedwitltthecoalingantlgen(1pg/mL100pLperwell)inO05Mcarbonatebicarbonatebuffer(pH96),madthenincubated
6、at37(2for2hoursSomeothermaterialssuchas2%defattedmilkpowder10%fetalcalfSgIllmO1%BSAand1%glufininO01MpH74phosphatebiphosphatebuffercouldimprovethesensitivityoftheELISAmethod,Adoptingtheoptimizedanal)tieconditionandHRPtagg
7、edAbi,theaffinityandspecifityofAbwereevaluatedbydirectoompetedELISAmethodResultsindicatedthatAblhadhighaffinityandspecifitytoCAPnelinearregressionequationforthemethodwasY=l094Ln(x130394,r=0999Thelimitofdetection(IC20)was
8、0386ng/mLThepercentagesofcrossreactionswiththiamphenicolandflorfenioolwcR0025%and0166%respectivelyandthosefortheotherrelativeantibioticswerelessthan210。,accordingwiththeliteratureTheELISAkitWaSpreparatedtodetecttheG心indi
9、伍erentmatrices,suchasshrimp,porkchickenandeggRecoveryofmethodstodetectCAPwererangedfrom716to1176%withcoefficientofvariationsoflessthanl39%atspikinglevelsof05,5,50ng/mL。ItwassuggestedthattheELISAKitcouldbeappliedtodemctth
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