樂果酶聯(lián)免疫試劑盒的研制.pdf

1、農(nóng)藥殘留是危害食品安全的重要原因，其中有機(jī)磷農(nóng)藥是目前使用最廣的一類農(nóng)藥，約占農(nóng)藥總使用量的70％，因此，對有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測是食品安全檢測的重要內(nèi)容。樂果是一種中等毒性的有機(jī)磷殺蟲劑，但其在體內(nèi)的氧化產(chǎn)物——氧樂果的毒性是樂果毒性的數(shù)十倍。目前用來檢測樂果的方法主要是氣相色譜(GC)和高效液相色譜(HPLC)，這些方法前處理步驟復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力、設(shè)備昂貴，需要專業(yè)人員操作，適宜實(shí)驗(yàn)室操檢測，不適宜大量樣品和現(xiàn)場快速檢測。 酶聯(lián)免疫

2、吸附分析(Enzyme-linkedimmunoassay，ELISA)方法快速、靈敏、選擇性好，適宜痕量物質(zhì)的檢測，同時(shí)還具有檢測成本低，操作簡便，安全可靠等優(yōu)點(diǎn)。所以研制樂果的酶聯(lián)免疫試劑盒具有重要的實(shí)際意義。本研究旨在解決檢測樂果殘留的試劑盒中的關(guān)鍵技術(shù)和科學(xué)問題。 根據(jù)樂果分子結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)及生物學(xué)特性，首先合成了樂果的半抗原，然后將半抗原與載體蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)合成樂果的免疫原和包被抗原。

3、 用合成的樂果免疫原免疫小鼠后獲得樂果的多克隆抗體，用間接ELISA測定抗體的效價(jià)為1：256000，親和常數(shù)為3.84×1010，酶標(biāo)抗體的效價(jià)是1：4000。除了氧化樂果以外，它與其他主要的有機(jī)磷農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率都很低。通過直接和間接ELISA檢測，確定樂果試劑盒的最佳包被介質(zhì)是0.05mol/L，pH9.6的碳酸鹽緩沖液、最佳包被溫度和包被時(shí)間是4℃、12h，包被原、抗體和酶標(biāo)二抗的最佳工作濃度分別0.8μg/mL、1：320