非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的臨床特征與分子生物學標記的研究.pdf

1、第一部分:非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的危險因素及腦預防照射價值的研究
　　目的：
　　非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率存在著巨大的變化，這引起了腦預防照射價值的不確定性，一些臨床病理特征可能與腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率相關(guān)，但是哪些臨床病理特征與腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生相關(guān)是不確定的。為此我們進行了這項研究，來系統(tǒng)的調(diào)查影響非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的危險因素和腦預防照射對腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率及對患者生存期的影響，以期為臨床非小細胞肺癌的腦預防照射及非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移特征的進一

2、步研究提供參考。
　　材料與方法：
　　根據(jù)我們的研究標準，對自1978年1月1日至2013年6月30日公開發(fā)表的文獻進行了檢索，最終獲取符合研究標準的文獻，提取相關(guān)數(shù)據(jù)，得到各研究中針對不同研究因素的效應值，使用以卡方檢驗為基礎的Q檢驗分析各研究間的異質(zhì)性，并以I2表示各研究的異質(zhì)性大小，之后根據(jù)各研究間異質(zhì)性的大小選擇固定效應模型或隨機效應模型對各研究的效應值進行合并meta分析。為評價meta分析結(jié)果的可靠性，使用基于

3、Begg檢驗為基礎的漏斗圖和Egger檢驗來評價各研究之間是否存在發(fā)表偏倚。對于不適合進行效應值合并者，采用描述性的統(tǒng)計方法對其結(jié)果進行評價。
　　結(jié)果：
　　根據(jù)我們的研究標準，最終得到13項關(guān)于腦轉(zhuǎn)移危險因素的研究和6項關(guān)于腦預防照射價值的隨機對照研究。這兩方面的研究分別登記了3182例病人和1237例病人。在研究中，我們對組織學類型及性別、年齡等因素與腦轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及腦預防照射對腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率的影響的效應進行了合并me

4、ta分析。結(jié)果顯示，鱗癌相對非鱗癌與低的腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生相關(guān)(p=0.000，pooled OR=0.47，95％CI=0.34-0.65);而腺癌相對于非腺癌及性別、年齡與腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生不相關(guān)(p＞0.05);腦預防照射可以降低非小細胞肺癌肺癌腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率(p=0.000，pooled OR=0.34，95％CI=0.23-0.50);描述性的統(tǒng)計方法傾向于血清癌胚抗原水平與腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生相關(guān);并且對于早期階段非小細胞肺癌，早的分期與低的腦

5、轉(zhuǎn)移發(fā)生率相關(guān);而腦預防照射未為患者帶來生存方面的獲益。漏斗圖和Egger檢驗顯示納入meta分析的研究不存在發(fā)表偏倚(p＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.鱗狀細胞癌相對于非鱗狀細胞癌是非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的有意義的保護因素。
　　2.性別、年齡、組織學分類（按腺癌和非腺癌分類）等對腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率沒有明顯影響;
　　3.對于早期階段非小細胞肺癌，早的分期與低的腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率相關(guān);
　　4.血清癌胚抗原水平可用

6、于預測非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生，但其分界值需要進一步研究;
　　5.目前研究尚不能支持吸煙、一般狀況評分、初始治療的反應等因素對非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移有何影響;
　　6.腦預防照射可以降低非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率，但并未為患者帶來生存上的獲益。
　　第二部分:miRNA-328、miRNA-378對可手術(shù)的局部晚期非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的預測價值及機制的研究
　　目的：
　　介于臨床病理特征在預測非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)

7、移方面的局限性和腫瘤的固有分子生物學特征決定了非小細胞肺癌在腦轉(zhuǎn)移方面的巨大差異，從分子生物學角度尋找可用于非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的預測指標，無疑將為非小細胞肺癌的腦預防照射提供指導。腫瘤組織中的miRNA-328、miRNA-378在先前以小樣本的臨床病例為基礎的miRNA測序研究中被發(fā)現(xiàn)與非小細胞肺癌的腦轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但缺乏大樣本的特征性臨床病例的支持，為此我們進行這項以特征性的大樣本的臨床病例為基礎的臨床研究，探索病人腫瘤組織中miR

8、NA-328、miRNA-378表達在預測非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移方面的預測價值，并從臨床角度探索其機制。
　　材料和方法：
　　1.制定病例的納入和剔除標準，然后根據(jù)此標準對2010年1月1日至2011年10月31日期間接受手術(shù)的非小細胞肺癌病例進行篩選，得到符合研究要求的特征性臨床病例;
　　2.對于符合標準的病例，對其進行定期隨訪，獲得其生存相關(guān)數(shù)據(jù);并根據(jù)隨訪期內(nèi)是否發(fā)生腦轉(zhuǎn)移分為腦轉(zhuǎn)移組和未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組，對于隨訪期

9、內(nèi)出現(xiàn)復發(fā)轉(zhuǎn)移的病例將其分為腦轉(zhuǎn)移組和非腦轉(zhuǎn)移組，并對其臨床病理特征進行比較，之后進行下一步研究;
　　3.用壽命表法計算全組病人、腦轉(zhuǎn)移組病人及非腦轉(zhuǎn)移組病人的總生存率、無病生存率及中位生存期，同時計算腦轉(zhuǎn)移組病人腦轉(zhuǎn)移發(fā)生的中位時間、1年和2年腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率及腦轉(zhuǎn)移后的生存率和中位生存期;用Kaplan-Meier法比較腦轉(zhuǎn)移組和非腦轉(zhuǎn)移組病人總生存率和無病生存率的差異;從而得到這組病人的生存特征的數(shù)據(jù);
　　4.獲取腦轉(zhuǎn)

10、移組和未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病例的石蠟標本，用RT-PCR法檢測腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織及癌旁組織、未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的表達情況，之后對腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織與癌旁組織、腦轉(zhuǎn)移組與未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的表達情況進行比較，得到腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378表達與非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的相關(guān)性;
　　5.獲取腦轉(zhuǎn)移組和未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人的石蠟

11、標本，用免疫組織化學的方法檢測其腫瘤組織中N-cadherin、E-cadherin、VEGF、PRKCA、S100B等蛋白的表達情況，之后對兩組病人上述蛋白的表達情況分別進行比較（x2檢驗），得到腫瘤組織中N-cadherin、E-cadherin、VEGF、PRKCA、S100B等蛋白的表達與非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的相關(guān)性;
　　6.對腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的表達情況和上述與腦轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的表

12、達情況進行相關(guān)（等級相關(guān)）分析，初步探索miRNA-328、miRNA-378促進腦轉(zhuǎn)移的機制;
　　7.多因素分析（logistic回歸）全組病人的性別、年齡、病理類型、T分期、N分期、術(shù)后放療等臨床病理特征與腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的表達水平與非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.根據(jù)納入和剔除標準，我們最終得到符合標準的病例86例，其隨訪期均超過了2年，在隨訪期內(nèi)出現(xiàn)復發(fā)轉(zhuǎn)移的

13、63例，其中腦轉(zhuǎn)移23例;腦轉(zhuǎn)移組(23例)與非腦轉(zhuǎn)移組（40例）比較、腦轉(zhuǎn)移組（23例）與未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組（63例）比較在臨床病理特征方面均無顯著差異;
　　2.符合標準病例的生存特征數(shù)據(jù):全組病例隨訪期內(nèi)死亡47例，其2年總生存率58％，3年總生存率43％，2年無病生存率37％，3年無病生存率27％，中位生存期32個月;腦轉(zhuǎn)移組病例2年生存率為35％，2年無病生存率0，中位生存期20個月;非腦轉(zhuǎn)移組病例2年生存率47％，2年無病

14、生存率21％，中位生存期為23個月;兩組病例無病生存率和總生存率比較，均有明顯統(tǒng)計學意義，x2=15.173、P=0.000和x2=4.288、P=0.038;對于發(fā)生腦轉(zhuǎn)移的病人，腦轉(zhuǎn)移發(fā)生的中位時間是10個月，1年內(nèi)腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率78.26％，2年內(nèi)腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率100％;腦轉(zhuǎn)移后的1年生存率38％，中位生存期10個月;
　　3.腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的2-△△Ct值分別為:1.152±0.3

15、83、1.104±0.302;癌旁組織中miRNA-328、miRNA-378的2-△△Ct值分別為:0.673±0.296、0.683±0.287，兩組比較均有顯著統(tǒng)計學意義，p值分別為:0.000、0.000。未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的2-△△Ct值分別為:0.797±0.330、0.784±0.295，與腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的2-△△Ct值相比較，兩

16、組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378表達均有顯著性差異，p值分別為:0.000、0.000。
　　4.對于腦轉(zhuǎn)移組和未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人，S100B、N-cadherin僅在個別病人的腫瘤組織細胞漿或/和細胞膜上有散在的表達，而E-cadherin在幾乎所有病人的腫瘤組織細胞漿和細胞膜上均呈中至高強度性表達，但上述三種蛋白在兩組病人腫瘤組織中的表達均無顯著差異（p值分別為1.000、0.890、0.200）;VEG

17、F在大部分病人的腫瘤組織細胞漿中均有輕至中等強度的表達，但其在兩組病人腫瘤組織中的表達也無顯著差異(p=0.510);而PRCKA在腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中的表達明顯強于未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組的病人腫瘤組織中的表達(p=0.010)。
　　5.腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328表達與PRKCA表達明顯相關(guān)，r=0.591，p值為0.003;而腫瘤組織中miRNA-378表達與PRKCA表達不相關(guān)，r=0.259，p值為0.232。

18、r>　　6.多因素分析臨床病理特征與病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378表達與非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的關(guān)系顯示:腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的表達是非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的有意義的危險因素，OR值分別為:8.806、17.915，p值分別為:0.013、0.007;而性別、年齡、病理類型、T分期、N分期、術(shù)后放療等因素對腦轉(zhuǎn)移無影響。
　　結(jié)論：
　　1.全組病人2年、3年總生存率、無病生存率及中

19、位生存期等數(shù)據(jù)均較文獻報道略好;而腦轉(zhuǎn)移組病人的總生存率和無病生存率均較非腦轉(zhuǎn)移組差;腦轉(zhuǎn)移組腦轉(zhuǎn)移發(fā)生時間及腦轉(zhuǎn)移后的生存率等數(shù)據(jù)與文獻報道相似;因此該組病例有良好的臨床代表性。
　　2.腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的表達水平均明顯高于腦轉(zhuǎn)移組病人癌旁組織和未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中的表達水平，顯示了良好的敏感性和特異性，故腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378表達與非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移

20、相關(guān)。
　　3.腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中PRKCA的表達強度明顯強于未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中的表達強度，而S100B、N-cadherin、E-cadherin、VEGF等在兩組病人腫瘤組織中的表達無顯著差異，故可認為非小細胞肺癌腫瘤組織中PRKCA的表達與其腦轉(zhuǎn)移明顯相關(guān);
　　4.腫瘤組織中miRNA-328對非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的影響與腫瘤組織中PRKCA表達相關(guān);而腫瘤組織中miRNA-378對非小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的影