高羊茅組織培養(yǎng)及再生體系的建立.pdf

1、本實驗先后用三個高羊茅（Festuca arundinacea）品種（“滬青矮”，“Plantation”和“Ttriple A”）的成熟種子及兩個高羊茅無性系（“上農(nóng)矮生高羊茅（SACD）”和“98-19”）的幼穗、葉尖和莖節(jié)等營養(yǎng)器官作為外植體，在Murashige and Skoog Stock（MS）培養(yǎng)基上分別添加不同濃度的2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）和6-芐氨基嘌呤（6-BA），探索其對愈傷組織的誘導(dǎo)、繼代和分化的最佳

2、濃度組合，以建立高羊茅種子和無性系的高效再生體系。 以完整種子為外植體時，誘導(dǎo)愈傷組織的最佳2,4-D濃度為8 mg/L，出愈率最高達(dá)65％，；不同濃度2,4-D誘導(dǎo)愈傷組織的出愈率存在顯著差異，最佳誘導(dǎo)濃度范圍為3～11mg/L，出愈率可以達(dá)到53％～65％；品種之間的愈傷誘導(dǎo)率有顯著差異，但與2,4-D濃度之間的互作不顯著；胚性愈傷組織誘導(dǎo)率，在不同2,4-D濃度的繼代培養(yǎng)基間無顯著差異，但與誘導(dǎo)培養(yǎng)基中2,4-D濃度之間存

3、在顯著差異，由11mg/L 2,4-D的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上所得的愈傷組織，經(jīng)繼代后的胚性愈傷組織出愈率最高達(dá)63％；2,4-D和6-BA單獨使用時對綠苗分化率的作用差異不顯著，但兩者的互作存在顯著差異，最佳分化培養(yǎng)基為MS+2,4-D 2mg/L+6-BA 1.5 mg/L，最高綠苗分化率為55％，平均綠色芽點數(shù)為3.6；將上述三品種成熟種子縱切，進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)，所用時間顯著縮短，最佳2,4-D濃度為2.5 mg/L，品種之間無顯著差異；在生根

4、培養(yǎng)基“1/2 MS+NAA 0.5 mg/L”上的生根率達(dá)100％。 以兩個“無性系”的營養(yǎng)器官為外植體時，發(fā)現(xiàn)幼穗（孕穗期）是誘導(dǎo)愈傷組織的最好的營養(yǎng)器官外植體，誘導(dǎo)愈傷組織出愈率最高達(dá)94％，而幼葉尖、幼莖、幼節(jié)則未能誘導(dǎo)出愈傷組織；不同濃度2,4-D誘導(dǎo)愈傷組織的出愈率存在顯著差異，最佳誘導(dǎo)濃度范圍為7～9mg/L，出愈率可以達(dá)到90％～94％；兩無性系愈傷誘導(dǎo)率間有顯著差異，但與2,4-D濃度之間的互作不顯著；繼代培養(yǎng)

5、基以MS加入2,4-D 4 mg/L的處理方案最好，胚性愈傷組織出愈率和綠色芽點誘導(dǎo)率最高，分別達(dá)到98％和78％，所得的胚性愈傷組織在“MS+2,4-D 2 mg/L+6-BA 1 mg/L”分化培養(yǎng)基中的綠苗分化率也較高（57％）；生根培養(yǎng)基采用“1/2 MS+NAA 0.5 mg/L”，生根率達(dá)100％。 此外，本實驗還進(jìn)行了胚性愈傷組織在含有不同濃度的潮霉素的MS繼代培養(yǎng)基中的敏感性試驗，確定以潮霉素作為選擇抗性標(biāo)記時，