日本雪椿組織培養(yǎng)再生體系的建立.pdf

1、為了解決日本雪椿引進(jìn)困難，種子和種苗來源不足，難以滿足林業(yè)建設(shè)和構(gòu)建生態(tài)文明社會(huì)的需求，本實(shí)驗(yàn)以雪椿葉片和莖段作為外植體，研究其再生植株體系，獲得改良的雪椿外植體最佳消毒方式及時(shí)間，有效減輕雪椿試驗(yàn)材料褐變的方法，雪椿再生體系建立的培養(yǎng)條件，雪椿愈傷組織誘導(dǎo)、增殖及分化的最佳激素配比，莖段誘導(dǎo)芽及芽增殖的最佳激素配比，再生植株生根方式方法。主要研究結(jié)果如下：
　?。?）雪椿外植體最佳消毒組合及時(shí)間
　　選取生長(zhǎng)健壯的雪椿植株

2、，剪取雪椿兩年生枝條嫩梢的莖段用自來水清洗30min，洗去浮塵，然后用洗潔精進(jìn)一步清洗，再用自來水將洗潔精殘留沖洗干凈，然后置于無(wú)菌室超凈工作臺(tái)上，用無(wú)菌水清洗1min，再用75％的乙醇浸泡20-30s，后用無(wú)菌水沖洗2次，放入0.1%HgCl2中，8min，取出后用無(wú)菌水沖洗5遍，置于無(wú)菌濾紙上吸干水分，接種于附加不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上做初代培養(yǎng)。
　?。?）雪椿愈傷組織誘導(dǎo)，增殖及分化的最佳激素配比
　　MS+

3、6-BA2.0mg/L-1+2,4-D0.5mg/L-1培養(yǎng)基是雪椿新生葉片愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基，MS+6-BA15mg/L-1+IBA0.5mg/L-1是葉片誘導(dǎo)愈傷組織的最佳增殖培養(yǎng)基；MS+6-BA3mg/L-1+NAA0.2mg/L-1+IBA0.5mg/L-1是愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)基；莖段誘導(dǎo)的愈傷組織具備分化不定芽的潛能。
　?。?）莖段誘導(dǎo)芽及芽增殖的最佳激素配比
　　在添加6-BA2.0mg/L-1+I

4、BA0.5mg/L-1的MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，以雪椿的嫩莖段為外植體，芽的誘導(dǎo)率達(dá)到97%，MS+6-BA2mg/L-1+NAA0.15mg/L-1+ZT2.0mg/L-1，MS+6-BA3mg/L-1+IBA0.5mg/L-1+NAA0.5mg/L-1適合不定芽的增殖培養(yǎng)，增殖系數(shù)分別達(dá)到83.2%和79.5%。
　　（4）雪椿植株的生根方式
　　日本雪椿不定芽生根的誘導(dǎo)方法是試管外濾紙橋生根法，該技術(shù)在溫度20-30℃、濕度