大豆馴化相關(guān)蛋白的研究.pdf

1、1、在蛋白提取、雙向電泳上樣量和等電聚焦程序方面對(duì)適于大豆葉片蛋白質(zhì)組學(xué)研究的雙向電泳技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn)：改進(jìn)的TCA/丙酮法能促進(jìn)蛋白質(zhì)復(fù)溶；蛋白上樣量增加至450μg可使低峰度蛋白得到更好的顯現(xiàn)；在等電聚焦程序中采用10小時(shí)低電壓除鹽可獲得更佳的聚焦效果。改進(jìn)后的方法獲得的栽培和野生大豆葉片蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜重復(fù)性好，經(jīng)ImageMaster軟件匹配，同組樣品組內(nèi)匹配率超過80％；不同樣品電泳圖譜可比性高，組間匹配率接近或超過80％。

2、 2、以改進(jìn)后的方法對(duì)栽培和野生大豆葉片(各17個(gè)品種的葉片混合制成樣品)進(jìn)行雙向電泳實(shí)驗(yàn)。電泳圖譜利用ImageMaster軟件分析，每張凝膠上平均找到668個(gè)置信蛋白質(zhì)點(diǎn)，對(duì)所有匹配蛋白質(zhì)點(diǎn)按Ratio值>1.5篩選，同時(shí)進(jìn)行T檢驗(yàn)分析(p<0.05)尋找顯著差異的蛋白質(zhì)：絕大多數(shù)蛋白無(wú)顯著差異，占栽培和野生組可匹配蛋白質(zhì)點(diǎn)總數(shù)的96.55％；在栽培和野生組間共找到了23個(gè)差異顯著的蛋白質(zhì)點(diǎn)，占總數(shù)的3.45％。其中，栽培表達(dá)

3、量上調(diào)的點(diǎn)有12個(gè)，下調(diào)的點(diǎn)11個(gè)，分別占總數(shù)的1.80％和1.65％。另外，通過ImageMaster軟件和人工肉眼分析比對(duì)，未能在栽培或野生群體中發(fā)現(xiàn)群體特有的蛋白。我們推論，馴化帶來(lái)的差異體現(xiàn)在少數(shù)蛋白質(zhì)表達(dá)量的變化上。 3、選取10個(gè)主要的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行單級(jí)質(zhì)譜分析(MALDI-TOF-MS)，均打出高質(zhì)量的峰圖，用Mascot檢索程序?qū)CBInr蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行全庫(kù)搜索，均獲得了相關(guān)蛋白或同源蛋白陽(yáng)性報(bào)告(p<0.