裸鼠原位腫瘤移植模型的建立及建模過程中出現(xiàn)過度角質(zhì)化現(xiàn)象的初步探討.pdf

1、理想的人類腫瘤動物模型的建立能夠為臨床抗腫瘤藥物的研發(fā)和治療新方法的研究提供科學(xué)的平臺。近年來人源性裸鼠原位移植腫瘤模型已成為現(xiàn)代腫瘤研究中應(yīng)用的最廣最有價值的模型，能夠很好的模擬人體內(nèi)腫瘤的自然生長過程和生物學(xué)行為。該模型的建立是利用人體腫瘤組織或是腫瘤細胞直接移植到裸鼠體內(nèi)相應(yīng)的器官而形成的腫瘤模型。
　　目的和意義利用腫瘤細胞系和人體腫瘤組織建立人源性裸鼠原位移植腫瘤模型。在建立模型的過程中，有數(shù)只實驗裸鼠不同程度的出現(xiàn)頸背

2、部皮膚過度角質(zhì)化的現(xiàn)象。針對模型建立中出現(xiàn)的這一異常現(xiàn)象，分析異常產(chǎn)生的原因，以及分析該現(xiàn)象對腫瘤模型的建立是否造成影響。為研發(fā)抗腫瘤藥物提供穩(wěn)定可靠的模型。
　　研究方法
　　一、原位移植人源性裸鼠腫瘤模型的建立
　　1、方法1:采用人乳腺癌MDA-MB-231-Luc細胞懸液進行裸鼠乳腺脂肪墊原位注射，建立細胞懸液原位法COI（Cellular Orthotropic Injection of Cell Suspe

3、nsions）模型。收集體外培養(yǎng)的對數(shù)生長期的人乳腺癌MDA-MB-231-Luc細胞，活細胞數(shù)＞95％，切開右側(cè)胸部第二對乳腺區(qū)皮膚暴露脂肪墊，緩慢注入細胞液后縫合創(chuàng)口。使用小鼠活體成像設(shè)備，對原位腫瘤進行監(jiān)測，并制作腫瘤生長曲線及裸鼠的體重變化曲線，通過以上指標(biāo)衡量模型建立成功與否。
　　2、方法2:選取肝癌病人手術(shù)切除的腫瘤，剔除壞死組織和淤血后，處理后切割成合適大小的瘤塊，建立完整組織塊原位移植法SOI（Surgical

4、Orthotropic Implantation of Histologically Intact Tumor Tissue）模型。將動物麻醉保定后肝癌原位移植模型是開腹在肝葉上直接用穿刺針接種瘤塊。接種好瘤塊后止血并關(guān)閉創(chuàng)口。待荷瘤鼠的腫瘤長至1000mm3時，將荷瘤鼠用過量吸入CO2氣體的方法安樂死，取出瘤塊進行鼠間傳代，并制作子代裸鼠的腫瘤生長曲線和動物體重變化曲線，衡量模型建立成功與否。
　　二、建模裸鼠過度角質(zhì)化現(xiàn)象原因

5、分析
　　在乳腺癌腫瘤模型建立的第14天，肝癌腫瘤模型建立的第17天，分別有5只和12只模型動物出現(xiàn)過度角質(zhì)化的現(xiàn)象，皮膚出現(xiàn)大量白色皮屑。
　　對異常裸鼠進行隔離觀察，采取異常模型裸鼠組織細菌分離培養(yǎng)革蘭氏染色鏡檢，培養(yǎng)物感染裸鼠檢測其致病性，組織病理學(xué)的檢查。并對裸鼠飼養(yǎng)環(huán)境進行空氣落下菌和微生物的監(jiān)測。
　　統(tǒng)計動物的發(fā)病率，分析異常腫瘤模型動物和正常腫瘤模型動物的腫瘤生長情況和體重的變化，比較其是否有顯著性差異

6、。
　　結(jié)果及結(jié)論
　　一、成功利用手術(shù)的方法建立原位移植人源性裸鼠腫瘤COI和SOI模型，并將SOI模型荷瘤進行穩(wěn)定皮下傳代。建立了穩(wěn)定可靠的腫瘤模型，并為腫瘤生長情況提供基本參數(shù)。
　　二、建模動物在出現(xiàn)過度角質(zhì)化現(xiàn)象的第3-7天后體重逐步恢復(fù)，過度角質(zhì)化現(xiàn)象消失，腫瘤繼續(xù)生長。培養(yǎng)分離出的革蘭氏陽性菌株對裸鼠并沒有強烈致病性；組織學(xué)檢查顯示，無明顯病理變化。建模動物沒有再次出現(xiàn)類似的臨床癥狀。統(tǒng)計學(xué)分析異常腫瘤模