黃芩苷對人淋巴細(xì)胞Toll樣受體的調(diào)節(jié).pdf

1、目的：研究黃芩苷對人淋巴細(xì)胞Toll樣受體(TLR)的調(diào)節(jié)，探討其在免疫調(diào)節(jié)方面的作用。 方法： 1.采用尼龍毛分離法分離人外周血T和B細(xì)胞。 2.采用UF-50流式分析尋找最佳黃芩苷作用濃度。 3.采用實(shí)時(shí)定量熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)，分析在最佳黃芩苷作用濃度處理前后TLRs的表達(dá)情況。 4.通過受體抑制實(shí)驗(yàn)和實(shí)時(shí)定量熒光RT-PCR探討黃芩苷對TLRs的調(diào)節(jié)位點(diǎn)。 結(jié)果：

2、 1.體外孵育48h后，1mg/ml的黃芩苷可以顯著促進(jìn)人T、B淋巴細(xì)胞增殖(P＜0.05)。 2.使用1mg/ml黃芩苷相對于未用黃芩苷處理的T、B細(xì)胞，其TLR3、TLR7、TLR8及TLR9mRNA的表達(dá)均有顯著增加(P＜0.05)，T細(xì)胞增加倍數(shù)分別為21、15、57和66倍，B細(xì)胞增加的倍數(shù)分別為24、20、61和63倍，TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6及TLR10 mRNA表達(dá)變化不顯著(P＞

3、0.05)。 3.在1mg/ml黃芩苷作用下人T、B細(xì)胞TLR3、7、8和9 mRNA在12h時(shí)表達(dá)已開始增加，除T細(xì)胞的TLR7 mRNA表達(dá)在48h時(shí)略有下降外，其余表達(dá)基本一直持續(xù)增加，至48h到達(dá)峰值。 4.人T、B細(xì)胞在被黃芩苷作用前使用鼠抗人TLR4單克隆抗體封閉，會(huì)顯著降低黃芩苷對TLR3、7、8和9 mRNA表達(dá)的誘導(dǎo)作用(P＜0.05)，使得T細(xì)胞增加倍數(shù)分別降為11、5、28和36倍，下降比率分別為4

4、7.6％、66.7％、50.9％和45.5％；B細(xì)胞增加的倍數(shù)分別降為12、11、30和31倍，下降比率分別為50.0％、45.0％、50.8％和50.8％。 結(jié)論： 1.黃芩苷在體外能顯著促進(jìn)T、B淋巴細(xì)胞增殖。 2.人外周血T、B細(xì)胞組成性表達(dá)含量差異較大的TLR1-10mRNA，黃芩苷在體外可以顯著上調(diào)人T、B淋巴細(xì)胞TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的表達(dá)，但對TLR1、TLR2、TLR4、