結(jié)直腸癌和結(jié)直腸腺瘤中TIP30基因表達影響凋亡的臨床研究.pdf

1、近年來隨著飲食結(jié)構(gòu)的改變,在我國結(jié)直腸癌發(fā)病率呈快速上升趨勢,嚴重威脅著人們的生命健康。目前結(jié)直腸癌的治療主要采用手術(shù)結(jié)合放化療的方法,但效果并不理想,主要與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)。腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是多基因、多因素、多步驟綜合作用的結(jié)果,其中包括腫瘤抑制基因在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起的重要作用,因此腫瘤抑制基因及其作用機制是當(dāng)今研究的熱點之一。TIP30是新發(fā)現(xiàn)的一個腫瘤抑制基因,它在人類許多腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。關(guān)于TIP30基因在結(jié)直腸

2、癌中的具體作用機制目前還不清楚。為了明確TIP30基因在結(jié)直腸癌中的作用,我們采用半定量RT-PCR分析法研究了結(jié)直腸癌和結(jié)直腸腺瘤組織中的TIP30基因的表達情況,并結(jié)合臨床病理資料進行分析,探討其對結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響。
　　 目的:旨在探討TIP30基因在結(jié)直腸癌、結(jié)直腸腺瘤和正常組織中的表達差別以及對細胞凋亡的影響,結(jié)合患者臨床病理資料分析TIP30基因表達水平在結(jié)直腸良惡性腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中的作用機制。

3、>　　 方法:1采用半定量RT-PCR方法分別檢測30例結(jié)直腸癌標本及其正常粘膜以及結(jié)直腸腺瘤標本中TIP30mRNA的表達情況,對比分析正常結(jié)直腸粘膜、結(jié)直腸癌和結(jié)直腸腺瘤組織之間TIP30基因的表達差異,結(jié)合臨床病理資料作相應(yīng)統(tǒng)計學(xué)處理。
　　 2各組患者同時留取標本經(jīng)10％中性福爾馬林液固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋切片,采用SP免疫組化方法,以羊抗人TIP30單克隆抗體分別測定各組標本TIP30蛋白的表達水平,實驗結(jié)果作相應(yīng)

4、統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 3各組患者同時留取流式細胞學(xué)檢測標本以70％乙醇固定,酶解制成單細胞懸液,以流式細胞儀計數(shù),應(yīng)用DNA細胞周期分析軟件,依據(jù)DNA分布組方圖,計算出細胞周期各時相分布的百分比,即G0/G1、S和G2/M期各占的百分比,并以此求出增殖指數(shù)(Proliferation index,PI)表示細胞的增殖活性,同時測定各組標本細胞凋亡率,比較分析各組組織細胞凋亡率的差異以及與TIP30基因表達的相關(guān)性。
　　

5、 結(jié)果:1在正常腸粘膜、結(jié)直腸腺瘤、結(jié)直腸癌中TIP30mRNA.的表達率分別為96.7％、83.5％、23.3％。TIP30基因在結(jié)直腸癌組織中的表達明顯低于前二者,經(jīng)統(tǒng)計分析有顯著差異。測得的TIP30mRNA的表達水平結(jié)果為:結(jié)直腸癌組織TIP30mRNA的表達水平(0.255±0.056)明顯低于正常粘膜組織的表達水平(0.475±0.073)(P<0.01),而結(jié)直腸腺瘤組織中TIP30mRNA的表達(0.414±0.053)

6、較正常粘膜組織無明顯差別(P>0.05)。但結(jié)直腸癌組織中的TIP30mRNA的表達明顯低于結(jié)直腸腺瘤(P<0.05)。
　　 2正常結(jié)直腸黏膜TIP30蛋白表達程度(130.15±3.49)與結(jié)直腸癌(40.52±3.80)有明顯差異(P<0.01),結(jié)直腸癌與結(jié)直腸腺瘤組(113.23±3.58)之間TIP30蛋白表達也有明顯差異(P<0.05)。但是正常結(jié)直腸黏膜及結(jié)直腸腺瘤之間的表達沒有明顯差異(P>0.05)。

7、　　 3結(jié)直腸正常粘膜、結(jié)直腸腺瘤和結(jié)直腸癌細胞的增值指數(shù)和凋亡率依次為20.579±2.160％、30.886±2.415％、45.843±0.721％和35.547±2.787％、20.936±2.883％、3.734±0.115％,隨著TIP30表達水平的降低增殖指數(shù)逐漸升高,而凋亡率卻呈依次下降趨勢,兩兩之間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 4患者的性別、年齡、腫瘤的分化程度、浸潤程度和分期與結(jié)直腸癌原發(fā)灶中

8、TIP30表達情況無明顯關(guān)系(P>0.05)。伴有遠處轉(zhuǎn)移或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中TIP30mRNA的表達率比不伴有轉(zhuǎn)移者明顯降低(P<0.05)。30例結(jié)直腸癌患者癌組織中TIP30基因的表達水平與組織細胞凋亡率之間呈正相關(guān)關(guān)系(r結(jié)直腸癌=0.392,t=0.003)；30例結(jié)直腸腺瘤患者癌組織中TIP30基因的表達水平與組織細胞凋亡率亦呈正相關(guān)關(guān)系(r結(jié)直腸腺癌=0.288,t=0.035),均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)