中藥復方五味腸炎寧治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥效評價與質(zhì)量控制.pdf

1、潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種炎癥性腸病，因其起病慢、易反復，存在癌變的可能，且發(fā)病率逐年增高，已成為研究熱點領(lǐng)域。本文引入了分子對接技術(shù)，結(jié)合傳統(tǒng)中醫(yī)藥理學和現(xiàn)代儀器分析等學科的理論及方法，以民間驗方“五味腸炎寧”為研究對象，重點圍繞五味腸炎寧抗菌抗炎化學物質(zhì)基礎、拆方(處方分析)、TNBS/乙醇致大鼠結(jié)腸UC病變模型和多指標定量指紋圖譜進行了研究。主要結(jié)論如下：
　　 ①基于藥物設計中分子對接的基本原理及研究方法，依托文獻和數(shù)據(jù)

2、庫，以組成中藥復方五味腸炎寧的5味藥材中的201個化學成分，及公認療效顯著的7個的西藥成分作為標準對照，采用Surflex-Dock分子對接軟件，將208個成分與相應5個抗菌靶點和2個抗炎靶點進行了分子對接。論文引入了相對分值(用“R”表示，R=藥材成分分值/對照成分分值)來比較本復方抗菌抗炎藥效結(jié)果，以超過相應對照成分分值(R≥1.0)和接近應對照成分分值(0.8≤R<1.0)為指標評價標準，研究發(fā)現(xiàn)：1)R≥1.0的化學成分有3個，

3、其中，來源于牛耳楓藥材中的抗菌成分17-hydroxyhomodapniphyllic acid和抗炎成分Calyciphylline J、來源于辣蓼藥材中的抗炎成分Quercetin-3-sulfate；0.8≤R<1.0的抗菌和抗炎成分分別達61個和30個，表明本方具有廣泛、可靠的抗菌和抗炎化學物質(zhì)基礎，印證了中藥復方具有多靶向、多途徑的治療特點。2)以R≥0.8的化學成分個數(shù)計，各藥材抗菌和抗炎百分比分別為，牛耳楓占37.10％和

4、34.37％、辣蓼占25.81％和28.13％、白術(shù)占4.84％和9.38％、茯苓占12.90％和12.50％、廣藿香占19.35％和15.63％，由高到低排序為：牛耳楓(君藥)>辣蓼(臣藥)>廣藿香(使藥)>茯苓(佐藥)>白術(shù)(佐藥)，從化學成分藥效模擬角度驗證了各藥材在本方中與傳統(tǒng)中醫(yī)的“君臣佐使”組方原則基本相符合。
　　 ②按中醫(yī)拆方理論及試驗方法，將本方拆分為牛耳楓、辣蓼、白術(shù)和茯苓藥對、廣藿香試驗組，加上本復方共5個

5、試驗組，通過建立體外抗菌，小鼠抗炎、健脾、止瀉和解痙止痛動物模型，以MIC、腫脹度和OD、血清淀粉酶和D-木糖、4h排便次數(shù)、扭體次數(shù)和給藥后不同時間痛閾為指標，考察了五味腸炎寧及其藥材(或藥對)在與UC有關(guān)的5個藥效方面的作用。結(jié)果表明：1)五味腸炎寧對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌和傷寒桿菌6個菌種的MIC以生藥計，分別為0.1984g/mL、0.0248g/mL、0.0992g/mL、0.7936g/mL

6、、0.3968g/mL和0.0496g/mL；5味藥材抗菌由強到弱排序為牛耳楓>辣蓼>廣藿香(除大腸埃希菌外)>白術(shù)和茯苓藥對，體外抗菌結(jié)果與分子對接藥效模擬基本一致。2)與正常對照組比較，五味腸炎寧、牛耳楓和辣蓼抗炎效果極顯著(P<0.01)，廣藿香抗炎效果顯著(P<0.05)；以腫脹度和光密度值來看，各藥材抗炎由強到弱排序為：牛耳楓>辣蓼>廣藿香>茯苓和白術(shù)藥對，小鼠抗炎結(jié)果與分子對接藥效模擬基本一致。3)與模型組比較，五味腸炎寧和

7、廣藿香健脾效果顯著(P<0.05)，白術(shù)和茯苓藥對健脾效果極顯著(P<0.01)。41與模型組比較，五味腸炎寧、牛耳楓、辣蓼、白術(shù)和茯苓藥對止瀉效果顯著(P<0.05)。5)與正常組比較，五味腸炎寧、牛耳楓和辣蓼降低小鼠扭體次數(shù)極顯著(P<0.01)，廣藿香顯著降低扭體次數(shù)(P<0.05)；與正常組比較，五味腸炎寧、牛耳楓和辣蓼均極顯著的提高小鼠在給藥后60min和120min熱板致痛痛閾時間(P<0.01)，廣藿香顯著提高小鼠在60m

8、in和120min熱板致痛痛閾時間(P<0.05)，白術(shù)和茯苓藥對顯著提高小鼠在120min熱板致痛痛閾時間(P<0.05)。
　　 ③根據(jù)UC的發(fā)病部位為結(jié)腸粘膜的炎癥及潰瘍，建立了TNBS/乙醇致大鼠結(jié)腸病變動物模型，以一般狀態(tài)和DAI、結(jié)腸組織病理形態(tài)學(肉眼觀察、CMDI和光學顯微鏡觀察)、細胞因子和氧自由基水平為評價指標，考察了五味腸炎寧高中低3種劑量的治療效果，結(jié)果表明：1)不同劑量的五味腸炎寧對病變大鼠一般狀態(tài)和結(jié)

9、腸組織病理形態(tài)學均有明顯的不同程度恢復。2)五味腸炎寧能降低病變大鼠血清中致炎細胞因子’TNF-α和IL-8、升高抗炎細胞因子IL-10的含量；能降低大鼠結(jié)腸組織中MDA含量，增加SOD和GSH-Px含量，表明它通過下調(diào)致炎細胞因子和上調(diào)抗炎細胞因子、清除氧自由基，使大鼠免疫功能恢復正常和減輕結(jié)腸粘膜損傷及炎癥。
　　 ④基于指紋圖譜的原理及研究方法，建立了本復方顆粒劑及原藥材共有HPLC色譜模式下的多指標定量指紋圖譜質(zhì)量評價方

10、法：1)據(jù)分子對接和相關(guān)成分藥效報道，以沒食子酸、綠原酸、茯苓酸、蘆丁、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和芹菜素6個定量控制關(guān)鍵化學成分，對11批原藥材及制成的顆粒進行了含量測定研究。2)考察了指紋圖譜的精密度、穩(wěn)定性、重復性、共有峰個數(shù)、峰面積和的百分比、相似度。結(jié)果表明所建立的多指標定量指紋圖譜質(zhì)量控制方法可行。
　　 綜上，分子對接抗菌抗炎藥效模擬、拆方試驗和大鼠UC模型藥效研究結(jié)果一致表明，“五味腸炎寧”是治療UC的有效中藥復方；Surfle