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文檔簡介
1、雞的卵巢卵泡生長發(fā)育過程中,細胞外基質(zhì)(Extracelluar matrix,ECM)經(jīng)歷連續(xù)的組織降解和重塑,基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)及其組織抑制劑(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase,TIMPs)協(xié)同作用以調(diào)節(jié)細胞與細胞之間、細胞與基質(zhì)之間的相互作用。MMP-13,亦稱膠原酶-3,可降解間質(zhì)膠原、IV和IX型膠原酶及多種E
2、CM成分。本研究對MMP-13在雞卵泡發(fā)育過程中的作用及其與產(chǎn)蛋性狀的關系進行了分析。結果如下:
1.qRT-PCR和Western blotting結果顯示:MMP-13在未開產(chǎn)雞卵巢中的表達較低,隨著年齡增長,在開產(chǎn)雞卵巢中表達極顯著升高(P<0.05)。在開產(chǎn)后雞的不同等級卵泡中,MMP-13的mRNA表達從SW(the small white follicle)到F5(the fifth large follicle)
3、升高,然后下降至F1(the first large follicle),在POF1(the first post-ovulatory follicle)中的表達又極顯著升高(P<0.01)。蛋白表達趨勢同mRNA基本一致,但差異不顯著(P>0.05)。
2.免疫組化檢測結果顯示,MMP-13蛋白在未開產(chǎn)雞(45d)卵巢膜細胞,卵母細胞內(nèi)、間質(zhì)細胞和顆粒細胞均檢測到信號,在性成熟雞卵巢的膜細胞層表達較高,且分布在血管周圍。
4、r> 3.本研究進一步分析了 MMP-13基因5′調(diào)控區(qū)的轉錄調(diào)控機制,雙熒光素酶活性分析結果表明–1863 bp至–1036 bp為關鍵啟動子區(qū);并在此區(qū)段檢測到6個SNP位點,在不同雞群中的基因型分布有差別。與隱性白洛克雞群體產(chǎn)蛋性狀的關聯(lián)分析結果表明,A–1356-C–1079基因型的母雞的開產(chǎn)日齡早于G–1356-T–1079基因型個體(P<0.05)。
4.進一步構建了不同基因型載體,轉染雞膜細胞后,檢測雙熒光素酶
5、的活性。結果顯示,A–1356-C–1079基因型的活性低于G–1356-T–1079基因型(P<0.01)。應用生物信息學在線軟件(http://www.genomatix.de/index.html),預測到在-1356、-1128和-1094位點分別有MELS、KLF7和Grhl2轉錄因子的結合位點。
總之,我們目前的研究結果表明:MMP-13在雞卵泡生長和POF退化過程中起著重要作用,其啟動子區(qū)的多態(tài)位點可以作為雞育種
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