聯(lián)合COX-2及EGFR抑制劑對(duì)肺癌放射增敏的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）及環(huán)氧化酶-2（Cyclooxygenase-2，COX-2）在肺癌的發(fā)生發(fā)展中有重要的作用，現(xiàn)在已有多種EGFR及COX-2抑制劑用于肺癌的單獨(dú)靶向治療或與放化療的綜合治療。但是單一靶點(diǎn)的治療療效不能令人滿意。本研究擬探討聯(lián)合應(yīng)用EGFR及COX-2抑制劑對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的放射增敏效應(yīng)及其潛在機(jī)制。 方法：

2、 體外培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞，噻唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)不同濃度厄洛替尼和塞來(lái)昔布各自對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的抑制作用，計(jì)算各自的IC50和IC20，選擇其IC20藥物濃度作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度。體外培養(yǎng)克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)厄洛替尼和塞來(lái)昔布聯(lián)合或不聯(lián)合放射線對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的作用，計(jì)算其存活分?jǐn)?shù)，繪制細(xì)胞存活曲線。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的變化；Western blots檢測(cè)Akt、pAkt的表達(dá)：建立裸鼠移植瘤檢測(cè)腫瘤生長(zhǎng)延

3、遲、增殖細(xì)胞比例等指標(biāo)，以此探索兩藥聯(lián)合放射增敏效應(yīng)的潛在機(jī)制。 結(jié)果： 1．MTT結(jié)果顯示厄洛替尼和塞來(lái)昔布對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞具有增殖抑制作用，呈劑量依賴性。厄洛替尼的IC50為（12．21±0．83）μmol/L、IC20約為（5．15±0．14）μmol/L；塞來(lái)昔布的IC50為（50．13±2．41）μmol/L、IC20約為（40．32±1．26）μmol/L。 2．體外培養(yǎng)克隆形成實(shí)驗(yàn)分析顯示，放

4、療+兩藥聯(lián)用組的Dq、D0及SF2均明顯低于單純放療組、放療+塞來(lái)昔布組及放療+厄洛替尼組；放療+兩藥聯(lián)用組SER為2．217，放療+厄洛替尼組SER為1．503，放療+塞來(lái)昔布組SER為1．299。兩藥聯(lián)用的放射增敏效應(yīng)明顯高于各自單藥的放射增敏效應(yīng)，兩藥聯(lián)用可以進(jìn)一步提高放射增敏作用。 3．流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果顯示厄洛替尼和塞來(lái)昔布可以使細(xì)胞阻滯在G1/G0期；與放射線聯(lián)合作用后，使S期細(xì)胞比例減少，兩藥合用作用更明顯

5、。檢測(cè)凋亡結(jié)果顯示塞來(lái)昔布和厄洛替尼均可以提高放射線誘導(dǎo)的凋亡，但兩藥聯(lián)用可以使其凋亡率達(dá)到最高，提示兩藥聯(lián)合作用可以進(jìn)一步提高放射線誘導(dǎo)的凋亡。 4．Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示照射前后、藥物作用前后及藥物增敏照射后Akt在蛋白表達(dá)水平?jīng)]有明顯改變；塞來(lái)昔布和厄洛替尼均能抑制pAkt的表達(dá)，照射能夠略提高pAkt蛋白的表達(dá)，與單純照射組相比，塞來(lái)昔布或厄洛替尼聯(lián)合照射組pAkt蛋白的表達(dá)減低，兩藥聯(lián)用并聯(lián)合照射組pAk

6、t蛋白的表達(dá)達(dá)到最低。 5．人肺腺癌A549裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)顯示聯(lián)合處理組腫瘤生長(zhǎng)延遲明顯，空白對(duì)照組腫瘤直徑從8mm長(zhǎng)至16mm所需要的天數(shù)為24天，單純放療組為48天，兩藥聯(lián)用組為38天，放療+兩藥聯(lián)用組為88天。兩藥聯(lián)用的EF為2．08。 結(jié)論： 厄洛替尼和塞來(lái)昔布各自均有放射增敏作用，兩藥聯(lián)合應(yīng)用可以進(jìn)一步提高放射效應(yīng)。其機(jī)制涉及到使細(xì)胞周期中對(duì)放射線不敏感的S期細(xì)胞減少到最低，并進(jìn)一步增強(qiáng)了放射線誘導(dǎo)的凋