RSB66和HSD13編碼蛋白質(zhì)的功能研究.pdf

1、　　本論文應用酵母雙雜交系統(tǒng)，以全長的RSB66蛋白為誘餌，篩選人睪丸cDNA文庫，共獲得2個與RSB66蛋白相互作用的分子：HSD45和HSD46。HSD45全長cDNA為985bp,開放讀碼框編碼221個氨基酸殘基的多肽鏈。Blast分析發(fā)現(xiàn)HSD45與一新基因完全相同。該基因因能通過與cyclinA1相互作用抑制CDK的活性，故命名為INCA1。HSD46全長cDNA為1163bp。開放讀碼框編碼317個氨基酸殘基的多肽鏈?，F(xiàn)已發(fā)

2、現(xiàn)在類人猿、家犬和牛的基因組中都有該基因的同源基因存在，提示該基因在進化上較保守。　　在進一步的研究中，我們分別選用了體外和體內(nèi)兩種體系確證了RSB66和HSD45的相互作用。首先，利用原核表達系統(tǒng)分別表達和純化了融合蛋白GST-HSD-45和His6-RSB66，將等量的純化His6-RSB66加到事先已結(jié)合GST-HSD45或GST的GlutathioneSepharose4B柱中進行GSTpulldown實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)His6-

3、RSB66與GST-HSD45同時被洗脫下來，證明這兩種蛋白質(zhì)在體外能發(fā)生相互作用?！　榱搜芯縍SB66和HSD45在精子發(fā)育階段的表達情況，我們制備了大鼠睪丸生精細胞涂片。用免疫熒光的方法檢測了這兩種蛋白質(zhì)在不同生精細胞中的定位。結(jié)果發(fā)現(xiàn)RSB66蛋白特異性的表達于圓型精子細胞，而且熒光信號主要分布于細胞漿中。由于RSB66基因來源于我們構(gòu)建的用初級精母細胞消減圓型精子細胞的消減cDNA文庫，上述結(jié)果也證實了我們建立的消減文庫的特