小麥赤霉病菌三個(gè)同源CYP51基因表達(dá)載體構(gòu)建和遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、細(xì)胞色素P450甾醇14α脫甲基酶(CYP51)是真菌麥角甾醇合成中的關(guān)鍵酶，也是唑類(lèi)殺菌劑作用靶標(biāo)。大部分真菌中含有一個(gè)或兩個(gè)CYP51基因，CYP51A，和CYP51B，而在鐮刀菌屬真菌中還有第三類(lèi)CYP51基因，稱(chēng)之為鐮刀菌屬特異性CYP51C基因。雖然已有研究表明，鐮刀菌中三個(gè)同源CYP51基因功能不同，CYP51B基因是真菌中最保守的CYP51基因，編碼最主要的甾醇14α-脫甲基酶;CYP51A基因則在CYP51B基因缺失或被

2、抑制時(shí)，或唑類(lèi)藥劑施用和逆境下大量誘導(dǎo)表達(dá)，用于互補(bǔ)CYP51B基因的功能;而CYP51C基因則不再作為甾醇14α-脫甲基酶，而與鐮刀菌對(duì)寄主小麥致病性及DON毒素合成密切相關(guān)。但是目前，關(guān)于鐮刀菌屬中三個(gè)CYP51基因的亞細(xì)胞定位尚無(wú)報(bào)道。本研究通過(guò)限制性酶切、連接的方法，構(gòu)建了CYP51C基因的過(guò)量表達(dá)載體pYGTC和互補(bǔ)融合表達(dá)載體pYK11C，構(gòu)建了RFP融合表達(dá)載體質(zhì)粒pKHR;并通過(guò)限制性酶切連接的方法和一步法試劑盒，構(gòu)建了