保幼激素耐受蛋白在大猿葉蟲生殖和滯育中的功能研究.pdf

1、保幼激素(JH)可調(diào)控昆蟲成蟲繁殖，缺失JH會(huì)導(dǎo)致蟲體生殖滯育，表明JH可能在昆蟲生殖發(fā)育和成蟲滯育中發(fā)揮著重要作用。目前JH在昆蟲生殖發(fā)育和成蟲滯育中的作用機(jī)理尚不明確。大猿葉蟲Colaphellusbowringi Baly是一種兼性滯育的蔬菜害蟲。在25℃下，長光照條件下誘導(dǎo)為注定滯育個(gè)體，短光照條件下誘導(dǎo)為注定非滯育個(gè)體，成蟲羽化到進(jìn)入滯育狀態(tài)的4天取食期為滯育準(zhǔn)備期。注定滯育個(gè)體在滯育準(zhǔn)備期內(nèi)卵巢未發(fā)育且無卵黃沉積，脂肪體發(fā)育

2、良好，后期填充整個(gè)腹部;注定非滯育個(gè)體卵巢發(fā)育良好，卵黃發(fā)生沉積，脂肪體稀疏。本研究以大猿葉蟲為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用RNAi技術(shù)探究保幼激素耐受蛋白（Met）在大猿葉蟲生殖和滯育中的功能。主要結(jié)果如下:
　　1.JH對(duì)大猿葉蟲卵巢發(fā)育和脂質(zhì)累積的影響
　　對(duì)大猿葉蟲注定滯育個(gè)體注射15μg保幼激素類似物Methoprene后，蟲體卵巢發(fā)育，發(fā)育程度與注定非滯育個(gè)體相似。相比對(duì)照組，Methoprene處理組Vg的表達(dá)水平上調(diào)，脂肪

3、體內(nèi)脂滴信號(hào)減弱，相對(duì)脂質(zhì)含量降低。
　　2.Met基因的克隆和與序列分析
　　通過從大猿葉蟲轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中獲得Met的序列信息，根據(jù)序列設(shè)計(jì)引物，經(jīng)克隆、測序以及拼接，獲得Met1、Met2基因的全長序列，cDNA全長分別為2045 bp、2044 bp。通過Expasy轉(zhuǎn)錄軟件進(jìn)行蛋白的功能結(jié)構(gòu)域分析發(fā)現(xiàn)兩種Met僅N端20個(gè)氨基酸存在差異，推測兩種Met基因功能可能類似。通過Met的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹發(fā)現(xiàn)兩種Met同屬一分

4、支，且與赤擬谷盜Met親緣性最高。
　　3.Met在大猿葉蟲生殖和滯育中的功能
　　采用RNAi技術(shù)對(duì)大猿葉蟲注定滯育個(gè)體干擾Met后外源施加Methoprene，Vg1和Vg2的相對(duì)表達(dá)均顯著低于對(duì)照組。干擾大猿葉蟲注定非滯育個(gè)體Met后，蟲體卵巢發(fā)育受抑制，類似于滯育蟲體的發(fā)育狀態(tài);脂肪體內(nèi)脂滴信號(hào)減弱，相對(duì)脂質(zhì)含量上升;相比對(duì)照組，脂肪體內(nèi)Fas、Hsp23、Hsp27的表達(dá)水平顯著上調(diào)，但Foxo、Hsp21的表達(dá)水