抗腫瘤新活性成分SYS330的小腸吸收機(jī)制的研究.pdf

1、SYS330是一種新的人工合成可口服的小分子酪氨酸激酶抑制劑，屬于苯胺喹唑啉類(lèi)藥物，目前尚處于非臨床研究階段。本文旨在利用Caco-2細(xì)胞模型和大鼠在體單向腸灌流模型研究SYS330小腸吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)理；建立SYS330的。HPLC測(cè)定方法，了解其基本理化穩(wěn)定性；并建立其在Caco-2細(xì)胞模型和大鼠在體單向腸灌流模型中的HPLC測(cè)定方法，對(duì)SYS330的系統(tǒng)的非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究對(duì)其進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)將起著重要的作用。本文的主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下

2、： 1.SYS330的檢測(cè)方法的建立及其理化穩(wěn)定性研究采用SYS330的HPLC法建立了測(cè)定SYS330的色譜條件如下，色譜柱：HypersilC18 BDS(200mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈：0.1mol/L乙酸銨(40:60)，0.03％TFA；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：248nm；柱溫：30℃；靈敏度：0,01ALIFS；進(jìn)樣量：10μL。日內(nèi)、日間精密度RSD％均在2％以下，準(zhǔn)確度均在99％以上。

3、進(jìn)一步考察了SYS330的理化穩(wěn)定性，在堿性條件、4℃及其以下貯存SYS330相對(duì)穩(wěn)定，可貯存30天。反復(fù)凍融3次對(duì)其穩(wěn)定性無(wú)影響。 2.SYS330對(duì)Caco-2細(xì)胞的毒性研究采用MTT比色法研究SYS330對(duì)Caco-2細(xì)胞的毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小于30μg/mL的SYS330溶液對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性；而大于30μg/mL的SYS330溶液對(duì)細(xì)胞呈現(xiàn)毒性。 3.Caco-2細(xì)胞模型的建立與確證通過(guò)測(cè)定Caco-2細(xì)胞單分子

4、層的跨膜電阻(TEER)來(lái)判斷模型是否成功建立。結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)條件下，經(jīng)過(guò)21天培養(yǎng)分化后，Caco-2細(xì)胞分化形成了具有細(xì)胞極性的單分子層結(jié)構(gòu)，跨膜電阻大于300Ω·cm<'2>，符合作為藥物小腸吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷囊蟆?4.SYS330在Caco-2細(xì)胞模型中吸收轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的研究采用Caco-2細(xì)胞模型來(lái)研究SYS330的細(xì)胞吸收轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)力學(xué)。本章考察了pH、濃度、ATP能量抑制劑、鉀-鈉泵抑制劑、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體

5、抑制劑、表面活性劑、P-gp抑制劑、MRP1和MRP2抑制劑以及細(xì)胞內(nèi)吞抑制劑等對(duì)SYS330的轉(zhuǎn)運(yùn)吸收和分泌的影響。結(jié)果總結(jié)如下：1)SYS330主要以被動(dòng)擴(kuò)散的方式轉(zhuǎn)運(yùn)吸收，藥物的AP-BL表觀滲透系數(shù)P<,app>為(1.061±0.012)×10<'-5>％m/s；2)在轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中受介質(zhì)pH的影響，酸性條件下可增加藥物的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)；3)藥物經(jīng)跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)，受到強(qiáng)烈的細(xì)胞內(nèi)吞作用，顯著降低了藥物的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)；4)在轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中可能受到P-

6、gp等小腸外排蛋白的外排作用，限制了藥物的吸收。 5.SYS330在大鼠在體單向腸灌流.腸系膜靜脈插管模型中吸收機(jī)制的研究采用大鼠在體單向腸灌流法與腸系膜靜脈插管模型相結(jié)合研究了SYS330在大鼠小腸的吸收機(jī)制及ATP能量抑制劑、P-gp抑制劑、MRP1和MRP2抑制劑對(duì)其吸收的影響。結(jié)果顯示，SYS330在小腸內(nèi)的吸收機(jī)制屬于被動(dòng)吸收；腸管通透率P<,lumen>和血管通透率P<,blood>分別約為(3.10±0.040)×