抗腫瘤新活性成分SYS330的小腸吸收機制的研究.pdf

1、SYS330是一種新的人工合成可口服的小分子酪氨酸激酶抑制劑，屬于苯胺喹唑啉類藥物，目前尚處于非臨床研究階段。本文旨在利用Caco-2細胞模型和大鼠在體單向腸灌流模型研究SYS330小腸吸收轉(zhuǎn)運的機理；建立SYS330的。HPLC測定方法，了解其基本理化穩(wěn)定性；并建立其在Caco-2細胞模型和大鼠在體單向腸灌流模型中的HPLC測定方法，對SYS330的系統(tǒng)的非臨床藥代動力學研究對其進一步研究和開發(fā)將起著重要的作用。本文的主要實驗結(jié)果如下

2、： 1.SYS330的檢測方法的建立及其理化穩(wěn)定性研究采用SYS330的HPLC法建立了測定SYS330的色譜條件如下，色譜柱：HypersilC18 BDS(200mm×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈：0.1mol/L乙酸銨(40:60)，0.03％TFA；流速：1.0mL/min；檢測波長：248nm；柱溫：30℃；靈敏度：0,01ALIFS；進樣量：10μL。日內(nèi)、日間精密度RSD％均在2％以下，準確度均在99％以上。

3、進一步考察了SYS330的理化穩(wěn)定性，在堿性條件、4℃及其以下貯存SYS330相對穩(wěn)定，可貯存30天。反復凍融3次對其穩(wěn)定性無影響。 2.SYS330對Caco-2細胞的毒性研究采用MTT比色法研究SYS330對Caco-2細胞的毒性。實驗結(jié)果表明，小于30μg/mL的SYS330溶液對細胞沒有毒性；而大于30μg/mL的SYS330溶液對細胞呈現(xiàn)毒性。 3.Caco-2細胞模型的建立與確證通過測定Caco-2細胞單分子

4、層的跨膜電阻(TEER)來判斷模型是否成功建立。結(jié)果表明在本實驗室的培養(yǎng)條件下，經(jīng)過21天培養(yǎng)分化后，Caco-2細胞分化形成了具有細胞極性的單分子層結(jié)構(gòu)，跨膜電阻大于300Ω·cm<'2>，符合作為藥物小腸吸收轉(zhuǎn)運的體外實驗?zāi)Ｐ偷囊蟆?4.SYS330在Caco-2細胞模型中吸收轉(zhuǎn)運機制的研究采用Caco-2細胞模型來研究SYS330的細胞吸收轉(zhuǎn)運動力學。本章考察了pH、濃度、ATP能量抑制劑、鉀-鈉泵抑制劑、葡萄糖轉(zhuǎn)運載體

5、抑制劑、表面活性劑、P-gp抑制劑、MRP1和MRP2抑制劑以及細胞內(nèi)吞抑制劑等對SYS330的轉(zhuǎn)運吸收和分泌的影響。結(jié)果總結(jié)如下：1)SYS330主要以被動擴散的方式轉(zhuǎn)運吸收，藥物的AP-BL表觀滲透系數(shù)P<,app>為(1.061±0.012)×10<'-5>％m/s；2)在轉(zhuǎn)運過程中受介質(zhì)pH的影響，酸性條件下可增加藥物的吸收轉(zhuǎn)運；3)藥物經(jīng)跨細胞轉(zhuǎn)運，受到強烈的細胞內(nèi)吞作用，顯著降低了藥物的吸收轉(zhuǎn)運；4)在轉(zhuǎn)運過程中可能受到P-

6、gp等小腸外排蛋白的外排作用，限制了藥物的吸收。 5.SYS330在大鼠在體單向腸灌流.腸系膜靜脈插管模型中吸收機制的研究采用大鼠在體單向腸灌流法與腸系膜靜脈插管模型相結(jié)合研究了SYS330在大鼠小腸的吸收機制及ATP能量抑制劑、P-gp抑制劑、MRP1和MRP2抑制劑對其吸收的影響。結(jié)果顯示，SYS330在小腸內(nèi)的吸收機制屬于被動吸收；腸管通透率P<,lumen>和血管通透率P<,blood>分別約為(3.10±0.040)×