止哮平喘方對哮喘大鼠嗜酸性粒細胞凋亡及調(diào)控基因表達的影響.pdf

1、目的: 本課題通過觀察止哮平喘方對哮喘大鼠癥狀評分、肺溢流量、氣管條張力、全血和肺泡灌洗液(BALF)中白細胞、嗜酸性粒細胞(EOS)數(shù)量、血清免疫球蛋白(Ig)E、白細胞介素(IL)-5、IL-13等的含量、支氣管肺組織形態(tài)學、氣道重塑參數(shù)、肺組織EOS凋亡及調(diào)控基因Fas、Bcl-2mRNA表達等的影響．圍繞EOS的凋亡，從免疫反應、氣道炎癥、氣道高反應性及氣道重塑等方面探討止哮平喘方的作用機制。 方法: 以

2、卵蛋白致敏和激發(fā)復制大鼠哮喘模型。SD大鼠隨機分為6組：正常對照組(簡稱正常組)、哮喘模型組(簡稱模型組)、地塞米松治療組(簡稱地塞米松組)、止哮平喘方小劑量組(簡稱小劑量組)、止哮平喘方中劑量組(簡稱中劑量組)、止哮平喘方大劑量組(簡稱大劑量組)，每組10只．實驗第8天，即第2次致敏的同一天開始給藥，共治療14天．觀察各組大鼠一般生活情況，并對末次激發(fā)10min時大鼠的癥狀表現(xiàn)進行評分．末次激發(fā)24h后，進行肺溢流實驗，處死大鼠，采集

3、標本。檢測離體氣管條張力，進行全血及肺泡灌洗液(BALF)中血細胞計數(shù)，ELISA法檢測血清IgE、IL-5、IL-13的含量，光鏡觀察支氣管肺組織形態(tài)學的改變，醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)測量氣道重塑參數(shù)，TUNEL法測定肺組織中EOS凋亡情況，原位雜交法測定肺組織Fas、Bcl-2mRNA的表達． 結果: 3.1大鼠激發(fā)時的一般狀況 模型組大鼠在吸入OVA激發(fā)后即出現(xiàn)躁動不安、搔抓頭面及全身皮毛、呼吸急促和明顯的腹式呼吸

4、、打噴嚏、口鼻紫紺、呼氣相喘鳴音等癥狀．反復激發(fā)后，大鼠毛色失去光澤，精神不振，反應遲鈍，體重較正常組明顯減輕(P＜0.05)．應用藥物干預后，各治療組癥狀明顯改善。 3.2癥狀積分比較 應用藥物干預后，各治療組大鼠激發(fā)后癥狀積分減少，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)。 3.3肺溢流量差值和離體氣管條張力變化比較 各治療組與模型組比較，大鼠肺溢流量變化明顯減少，有顯著性差異(P＜0.

5、01或P＜0.05)．與模型組比較，正常組及各治療組大鼠氣管條張力明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)。 3.4哮喘大鼠全血和BALF中白細胞總數(shù)、EOS百分率比較 模型組大鼠全血和BALF中自細胞總數(shù)、EOS百分率顯著增加，與正常組比較均有顯著性差異(P＜0.01)．各治療組大鼠全血和BALF中白細胞總數(shù)、EOS百分率均降低，與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)，其中地塞米松組和止哮平喘方大劑量組

6、全血和BALF中自細胞總數(shù)和EOS百分率與正常組比較無顯著性差異(P＞0.05)，中劑量組全血白細胞總數(shù)和EOS百分率與正常組比較無顯著性差異(P＞0.05)． 3.5哮喘大鼠血清IgE、IL-5、IL-13含量比較 模型組大鼠血清IgE、IL-5、IL-13含量明顯升高，與正常組比較均有顯著性差異(P＜0.01)．各治療組大鼠血清IgB、IL-5、IL-13含量較模型組均明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)，其中地塞

7、米松組和止哮平喘方大劑量組血清IgE含量與正常組比較無顯著性差異(P＞0.05)，各治療組血清IL-5和IL-13含量與正常組比較，無顯著性差異(P＞0.05)。 3.6支氣管肺組織形態(tài)學光鏡觀察 哮喘模型組大鼠氣道炎癥明顯、管腔狹窄、肺泡隔明顯增寬、平滑肌增厚；地塞米松組和止哮平喘方大、中劑量組均能顯著減輕大、小氣道及肺組織炎癥情況，支氣管肺組織大致正常；而小劑量組則變化?。?3.7氣道重塑圖像分析參數(shù)比較

8、 模型組支氣管總管壁厚度(WAt/Pbm)、平滑肌厚度(WAm/Pbm)、平滑肌細胞數(shù)(N/Pbm)均明顯高于正常組(P＜0.01)．地塞米松組、止哮平喘方大、中劑量組WAt/Pbm、WAm/Pbm和N/Pbm值均較模型組降低，結果有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)．小劑量組WAt/Pbm和N/Pbm值較模型組降低(P＜0.05)，但WAm/Pbm與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)． 3.8大鼠肺組織EOS凋亡

9、及Fas、Bcl-2mRNA的表達 模型組大鼠肺組織中EOS的數(shù)量較多，但EOS凋亡減少，同時FasmRNA表達明顯降低、Bcl-2mRNA的表達明顯增加，與正常組比較有顯著性差異(P＜0.01)。各治療組EOS凋亡增加，同時FasmRNA表達也增加、Bcl-2mRNA的表達降低，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)，且與止哮平喘方有明顯的劑量依賴關系．FasmRNA表達與EOS凋亡呈正相關(P＜0.01)，而