止哮平喘方對(duì)哮喘大鼠嗜酸性粒細(xì)胞凋亡及調(diào)控基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的: 本課題通過(guò)觀察止哮平喘方對(duì)哮喘大鼠癥狀評(píng)分、肺溢流量、氣管條張力、全血和肺泡灌洗液(BALF)中白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)數(shù)量、血清免疫球蛋白(Ig)E、白細(xì)胞介素(IL)-5、IL-13等的含量、支氣管肺組織形態(tài)學(xué)、氣道重塑參數(shù)、肺組織EOS凋亡及調(diào)控基因Fas、Bcl-2mRNA表達(dá)等的影響．圍繞EOS的凋亡，從免疫反應(yīng)、氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性及氣道重塑等方面探討止哮平喘方的作用機(jī)制。 方法: 以

2、卵蛋白致敏和激發(fā)復(fù)制大鼠哮喘模型。SD大鼠隨機(jī)分為6組：正常對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)正常組)、哮喘模型組(簡(jiǎn)稱(chēng)模型組)、地塞米松治療組(簡(jiǎn)稱(chēng)地塞米松組)、止哮平喘方小劑量組(簡(jiǎn)稱(chēng)小劑量組)、止哮平喘方中劑量組(簡(jiǎn)稱(chēng)中劑量組)、止哮平喘方大劑量組(簡(jiǎn)稱(chēng)大劑量組)，每組10只．實(shí)驗(yàn)第8天，即第2次致敏的同一天開(kāi)始給藥，共治療14天．觀察各組大鼠一般生活情況，并對(duì)末次激發(fā)10min時(shí)大鼠的癥狀表現(xiàn)進(jìn)行評(píng)分．末次激發(fā)24h后，進(jìn)行肺溢流實(shí)驗(yàn)，處死大鼠，采集

3、標(biāo)本。檢測(cè)離體氣管條張力，進(jìn)行全血及肺泡灌洗液(BALF)中血細(xì)胞計(jì)數(shù)，ELISA法檢測(cè)血清IgE、IL-5、IL-13的含量，光鏡觀察支氣管肺組織形態(tài)學(xué)的改變，醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)測(cè)量氣道重塑參數(shù)，TUNEL法測(cè)定肺組織中EOS凋亡情況，原位雜交法測(cè)定肺組織Fas、Bcl-2mRNA的表達(dá)． 結(jié)果: 3.1大鼠激發(fā)時(shí)的一般狀況 模型組大鼠在吸入OVA激發(fā)后即出現(xiàn)躁動(dòng)不安、搔抓頭面及全身皮毛、呼吸急促和明顯的腹式呼吸

4、、打噴嚏、口鼻紫紺、呼氣相喘鳴音等癥狀．反復(fù)激發(fā)后，大鼠毛色失去光澤，精神不振，反應(yīng)遲鈍，體重較正常組明顯減輕(P＜0.05)．應(yīng)用藥物干預(yù)后，各治療組癥狀明顯改善。 3.2癥狀積分比較 應(yīng)用藥物干預(yù)后，各治療組大鼠激發(fā)后癥狀積分減少，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)。 3.3肺溢流量差值和離體氣管條張力變化比較 各治療組與模型組比較，大鼠肺溢流量變化明顯減少，有顯著性差異(P＜0.

5、01或P＜0.05)．與模型組比較，正常組及各治療組大鼠氣管條張力明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)。 3.4哮喘大鼠全血和BALF中白細(xì)胞總數(shù)、EOS百分率比較 模型組大鼠全血和BALF中自細(xì)胞總數(shù)、EOS百分率顯著增加，與正常組比較均有顯著性差異(P＜0.01)．各治療組大鼠全血和BALF中白細(xì)胞總數(shù)、EOS百分率均降低，與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)，其中地塞米松組和止哮平喘方大劑量組

6、全血和BALF中自細(xì)胞總數(shù)和EOS百分率與正常組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，中劑量組全血白細(xì)胞總數(shù)和EOS百分率與正常組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)． 3.5哮喘大鼠血清IgE、IL-5、IL-13含量比較 模型組大鼠血清IgE、IL-5、IL-13含量明顯升高，與正常組比較均有顯著性差異(P＜0.01)．各治療組大鼠血清IgB、IL-5、IL-13含量較模型組均明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)，其中地塞

7、米松組和止哮平喘方大劑量組血清IgE含量與正常組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，各治療組血清IL-5和IL-13含量與正常組比較，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。 3.6支氣管肺組織形態(tài)學(xué)光鏡觀察 哮喘模型組大鼠氣道炎癥明顯、管腔狹窄、肺泡隔明顯增寬、平滑肌增厚；地塞米松組和止哮平喘方大、中劑量組均能顯著減輕大、小氣道及肺組織炎癥情況，支氣管肺組織大致正常；而小劑量組則變化?。?3.7氣道重塑圖像分析參數(shù)比較

8、 模型組支氣管總管壁厚度(WAt/Pbm)、平滑肌厚度(WAm/Pbm)、平滑肌細(xì)胞數(shù)(N/Pbm)均明顯高于正常組(P＜0.01)．地塞米松組、止哮平喘方大、中劑量組WAt/Pbm、WAm/Pbm和N/Pbm值均較模型組降低，結(jié)果有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)．小劑量組WAt/Pbm和N/Pbm值較模型組降低(P＜0.05)，但WAm/Pbm與模型組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)． 3.8大鼠肺組織EOS凋亡

9、及Fas、Bcl-2mRNA的表達(dá) 模型組大鼠肺組織中EOS的數(shù)量較多，但EOS凋亡減少，同時(shí)FasmRNA表達(dá)明顯降低、Bcl-2mRNA的表達(dá)明顯增加，與正常組比較有顯著性差異(P＜0.01)。各治療組EOS凋亡增加，同時(shí)FasmRNA表達(dá)也增加、Bcl-2mRNA的表達(dá)降低，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)，且與止哮平喘方有明顯的劑量依賴(lài)關(guān)系．FasmRNA表達(dá)與EOS凋亡呈正相關(guān)(P＜0.01)，而