實(shí)驗(yàn)犬留置不同類型氣管支架的基礎(chǔ)研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)犬留置不同類型氣管支架的基礎(chǔ)研究前言 氣管覆膜支架植入是近年來(lái)發(fā)展的介入治療新技術(shù)，主要應(yīng)用于食管、氣管、支氣管的惡性腫瘤所引起的氣管、支氣管重度狹窄及氣管食管瘺的治療?；颊吆粑щy常因呼吸衰竭而死亡。該方法保持呼吸道通暢，可立即解除呼吸道梗阻的癥狀，有甚為顯著的效果，使瀕臨死亡的患者生命得以挽救。由于支架有膜覆蓋，能夠阻擋癌腫向腔內(nèi)生長(zhǎng)，可以明顯延長(zhǎng)患者生命，使患者從容的接受治療，提高患者生存質(zhì)量。隨著介入治療技術(shù)及器材的

2、發(fā)展和普及，該術(shù)式的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，也帶來(lái)了一些疑問(wèn)：氣管覆膜支架植入術(shù)會(huì)不會(huì)引起氣管壁纖毛功能喪失，導(dǎo)致痰潴留，程度如何?氣管覆膜及不覆膜支架植入后對(duì)氣管壁的影響如何。本課題應(yīng)用基礎(chǔ)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，為氣管覆膜支架植入的應(yīng)用價(jià)值提供理論依據(jù)。 材料與方法 一、實(shí)驗(yàn)對(duì)象與分組 健康成年雜種犬18只，犬齡18-24個(gè)月，平均21個(gè)月。實(shí)驗(yàn)犬隨機(jī)分為3組，每組6條。各組實(shí)驗(yàn)犬在留置支架后20個(gè)周之后，分別處死。

3、二、材料與儀器 氣管支架(全覆膜、中段覆膜、不覆膜)與推動(dòng)器、SHIMADZUDIGITEX2400αDSA機(jī)、Philips16排螺旋CT、PCNA免疫組化試劑盒及其他儀器與藥品。三、實(shí)驗(yàn)步驟1.術(shù)前準(zhǔn)備術(shù)前12小時(shí)實(shí)驗(yàn)犬禁食水。2.麻醉與固定速眠新2號(hào)一支肌肉注射快速麻醉，并腹腔補(bǔ)以苯巴比妥(30m∥kg)支持麻醉。仰臥位固定。3.支架放置透視監(jiān)視下經(jīng)口置入支架。支架下端距隆突5cm。放置后正側(cè)位攝片。 4.CT掃描

4、后行多平面重建及三維重建。 5.實(shí)驗(yàn)犬飼養(yǎng)觀察術(shù)后給予抗炎，進(jìn)流食。 6.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取材3組實(shí)驗(yàn)犬在留置支架后20個(gè)周之后，分別處死。行CT掃描后三維重建。肉眼觀察氣管內(nèi)壁及粘膜變化。在支架上緣、中段、下緣處氣管分別取材。10％中性福爾馬林固定。 7.切片制作與染色標(biāo)本經(jīng)脫水、透明、浸蠟后制成石蠟包塊，每個(gè)標(biāo)本切片5張。HE染色后顯微鏡下觀察。 8.檢測(cè)PCNA表達(dá)石蠟切片脫蠟、水化，檢測(cè)PCNA步驟按說(shuō)明

5、書進(jìn)行。最后DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片。 四、結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) PCNA陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞核染色。采用MetamorphImaginerSystemV4.6圖像分析系統(tǒng)，對(duì)每張切片的免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行定量分析。采集圖像并測(cè)量組織陽(yáng)性細(xì)胞核的平均積分吸光度值作為該標(biāo)本測(cè)量結(jié)果。 五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包。對(duì)各組標(biāo)本中PCNA陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)行定量分析，每?jī)山M之間采用兩樣本的隨機(jī)T檢驗(yàn)方法

6、。以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 各組實(shí)驗(yàn)犬均無(wú)支架留置后的急性呼吸困難發(fā)生，蘇醒后均有輕度嗆咳，3～4天后好轉(zhuǎn)，各組癥狀相似。各組經(jīng)觀察，其排痰量并無(wú)明顯差異。實(shí)驗(yàn)犬均可正常飲水、進(jìn)食，發(fā)聲無(wú)異常。2周后部份實(shí)驗(yàn)犬活動(dòng)減少。支架不覆膜處，氣管內(nèi)壁組織增生明顯，氣管腔出現(xiàn)狹窄。支架覆膜處氣管內(nèi)壁組織輕度增生，氣管腔未出現(xiàn)明顯狹窄。支架不覆膜處，HE染色鏡下表現(xiàn)為炎性反應(yīng)，低柱狀上皮細(xì)胞鱗狀化生明顯、肉芽增生和纖維增

7、生性改變。支架覆膜處，表現(xiàn)為炎性反應(yīng)、低柱狀上皮細(xì)胞鱗狀化生、部份粘膜輕度肉芽增生。 覆膜組與不覆膜組，半覆膜組的覆膜處與不覆膜處的粘膜增殖細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。不覆膜處的粘膜增殖細(xì)胞比率較高。 結(jié)論 1.氣管支架覆膜的有無(wú)在留置的短期內(nèi)對(duì)于進(jìn)食、呼吸狀況及痰液的排出無(wú)明顯影響。 2.氣管支架留置后，覆膜段氣管內(nèi)膜組織增生水平要小于不覆膜段。 3.氣管支架留置后，覆膜段的