強肝丸抗酒精性肝纖維化的實驗研究.pdf

1、目的：肝纖維化(hepatic fibrosis)是指肝細胞發(fā)生壞死和炎癥刺激時，結(jié)締組織生長因子異常增加而致成纖維細胞增殖及細胞外基質(zhì)集聚，從而導致肝內(nèi)結(jié)締組織增生與沉積的病理過程，是各種肝病發(fā)展為肝硬化的必經(jīng)階段和病理變化途徑，目前認為是可逆的。因此抗肝纖維化是治療肝病、防止肝纖維化向肝硬化發(fā)展的重要環(huán)節(jié)，而早期診斷肝纖維化是關鍵。雖然病理組織學檢查是肝纖維化診斷的金標準，但難以在臨床廣泛開展，而非創(chuàng)傷性的血清學檢查很容易被患者接受

2、，因此尋找可靠而敏感的血清學指標和篩選有效的抗肝纖維化藥物一直是肝病研究的熱點。酒精性肝纖維化(alcoholic liver fibrosis AF)是酒精性肝硬化的早期階段，其可逆性已經(jīng)得到共識，目前臨床上治療肝纖維化尚缺乏療效確切的藥物，近年來研究顯示許多中醫(yī)方藥對肝纖維化有很好的治療效果。強肝丸是臨床上常用的治療氣血不足的肝郁脾虛、腎虛型慢性肝炎的有效復方。為了擴大該藥的適應癥，本實驗在成功復制大鼠酒精性肝纖維化模型的基礎上，從

3、動物實驗角度探討酒精性肝纖維化發(fā)生發(fā)展的機理以及“強肝丸”抗酒精性肝纖維化的作用，為臨床預防和治療酒精性肝纖維化新藥的研法提供實驗理論依據(jù)，并為“強肝丸”進一步推廣應用提供依據(jù)。 1、實驗方法 1.1、肝纖維化模型制備： SD大鼠140只(雌雄各半)，適應性飼養(yǎng)一周后隨機取10只大鼠作為正常組，剩余130只大鼠全部用于模型制備。采用“白酒、植物油、吡唑”混合液灌胃，配合飼喂高脂飼料的方法復制動物模型，造模時間為1

4、6周，每周連續(xù)灌胃6天后休息1天。具體方法是：首先將白酒、植物油、吡唑三種成分按重量比1000:250:3的比例混合成懸液，然后于每天上午8:00～9:00，下午6:00～7:00用該混和液給模型組大鼠灌胃，灌胃量為1.5ml/100g。每周一在灌胃前給大鼠稱重，根據(jù)動物體重變化估算每周的灌胃劑量，全部模型組大鼠飼喂高脂飼料(高脂飼料配方：基礎飼料、膽固醇、豬大油三者的比例為79％：1％：20％)，自由飲水?？瞻讓φ战M大鼠飼喂普通飼料，

5、生理鹽水灌胃，自由飲水。 1.2、實驗分組： 模型復制結(jié)束后，將模型組存活大鼠隨機分成5組：模型組(10只)、陽性西藥(秋水仙堿)治療組(10只)、高劑量中藥治療組(10只)、中劑量中藥治療組(10只)和低劑量中藥治療組(10只)。正常組和模型組大鼠以生理鹽水灌胃，灌胃量均為1ml/(100g·d)；藥物干預組灌胃給藥，劑量分別為1.4g/(Kg·d)、0.7g/(Kg·d)、0.35g/(Kg·d)，相當于人臨床給藥量

6、的14倍、7倍、3.5倍，藥物治療時間為4周。治療結(jié)束后將所有存活大鼠用烏拉他(2ml/kg)麻醉后，肝門靜脈采血，分離血清，取部分大鼠肝組織常規(guī)石蠟包埋、切片行HE染色。 1.3、觀測指標(1)動物的一般情況，包括精神狀態(tài)、皮毛光澤度、食量、大小便等； (2)血生化指標的測定，包括血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總蛋白(TP)、白蛋白(A)、球蛋白(G)；放免檢測血清層粘連蛋白(LN)、透明質(zhì)酸(HA)

7、和Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)。 (3)光鏡下HE染色觀察各大鼠肝臟病理組織學改變，包括肝細胞脂肪變性、壞死及炎細胞浸潤等：病理分級標準參照王泰齡法。 1.4、統(tǒng)計學處理有關資料以-x±s和等級資料表示，應用方差分析和多樣本秩和檢驗分別對計量資料和等級資料進行分析。 2、結(jié)果： 通過以上實驗得到下列結(jié)果： 2.1、酒精性肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中血清中自蛋白和總蛋白沒有明顯變化2.2、層粘連蛋白(LN)、透明質(zhì)

8、酸(HA)和Ⅳ型膠原(Ⅳ一C)，此三項含量在酒精性肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中均呈升高趨勢，2.3、酒精性肝纖維化發(fā)生過程中伴隨肝細胞脂肪、糖和蛋白質(zhì)代謝紊亂； 2.4、實驗性酒精性肝纖維化，其主要病理特征是肝竇毛細血管化和竇周纖維化； 2.5、復方強肝丸抗酒精性肝纖維化的作用機制主要為： (1)減輕肝臟細胞損傷和炎癥反應，抑制膠原合成(2)調(diào)節(jié)機體免疫功能，減少肝細胞的免疫損傷(3)抑制ECM的合成、促進ECM的降解