泥鰍凍干粉保肝及抗肝纖維化實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究泥鰍凍干粉( Misgurnus anguillicaudatus Cantor lyophilized powder，簡(jiǎn)稱MLP)的保肝及抗肝纖維化作用，并探討其作用機(jī)制。
　　方法：(1)采用急性毒性試驗(yàn)確定MLP的LD50或最大給藥量。給予MLP最大濃度劑量12.48g/kg，連續(xù)觀察7d，記錄小鼠體重及毒性反應(yīng)情況。(2)篩選泥鰍不同部位凍干粉對(duì)小鼠CCl4肝損傷的保護(hù)作用。分別給予泥鰍全粉、泥鰍肌肉粉和泥鰍皮凍

2、干粉，給藥劑量100mg/kg，連續(xù)10d，第11d時(shí)，ip0.4﹪的CCl4油溶液。眼眶取血，制備血清，測(cè)血清中ALT、AST含量。(3)建立小鼠CCl4急性肝損傷模型，分別給予不同劑量MLP（100、200、400 mg/kg），制備血清，測(cè)血清中ALT、AST含量。(4)建立小鼠CCl4肝纖維化模型，分別給予不同劑量MLP(50、100、200 mg/kg)。測(cè)血清中ALT、AST含量及組織中Hyp含量，并通過病理切片HE染色和M

3、asson染色觀察組織病理改變。(5)建立大鼠DMN肝纖維化模型，分別給予不同劑量MLP(50、100、200mg/kg)，扶正化瘀膠囊為陽性藥，測(cè)定指標(biāo)同小鼠肝纖維化模型。(6)在抗肝纖維化實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，深入研究其作用機(jī)制，采用ELISA方法檢測(cè)MMPs、TIMP-1，HA、LN及膠原PC-III、C-IV、TGF-β1含量，Western Blot方法檢測(cè)組織中α-SMA、TIMP-1蛋白含量，免疫組化法檢測(cè)α-SMA、TIMP-1的

4、蛋白表達(dá)及分布情況。
　　結(jié)果：(1) MLP最大給藥濃度時(shí)，無中毒癥狀及死亡，提示MLP在12.48g/kg濃度內(nèi)是安全的。(2)泥鰍不同部位凍干粉保肝作用篩選結(jié)果，泥鰍肌肉粉和泥鰍全粉給藥均能顯著降低血清中ALT、AST水平( P＜0.05)，泥鰍皮無明顯效果。由于泥鰍肌肉粉和泥鰍全粉給藥的作用無明顯差異，考慮到制作工藝，選擇泥鰍全粉作為實(shí)驗(yàn)藥物。(3)MLP對(duì)小鼠CCl4急肝損傷的保護(hù)作用中，與模型組相比，MLP能顯著下調(diào)血

5、清中ALT、AST水平(P＜0.05)，尤其高劑量組(P＜0.01)。(4)在小鼠CCl4肝纖維化模型中，MLP能降低組織中Hyp含量(P＜0.05)。病理組織切片觀察到肝纖維化模型組中肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝細(xì)胞呈氣球樣變性、羽毛樣變性，匯管區(qū)有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。膠原纖維構(gòu)成纖維間隔，完整的假小葉形成。MLP三個(gè)劑量組中肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，肝細(xì)胞腫大，有變性，程度均輕于模型組。尤其高劑量組，炎癥細(xì)胞少見，膠原纖維少。同時(shí)肝纖維化SSS評(píng)分較

6、治療前下降＞2分，提示MLP能顯著減輕肝纖維化程度。(5)抗DMN大鼠肝纖維化實(shí)驗(yàn)中，MLP能顯著降低血清中ALT、AST水平(P＜0.05)和組織中Hyp含量(P＜0.05)，升高血清中白蛋白Alb含量(P＜0.05)。病理切片觀察MLP給藥后肝細(xì)胞基本正常，炎癥細(xì)胞少見，膠原纖維明顯減少。(6)ELISA結(jié)果顯示MLP能下調(diào)HA、LN水平以及PC-III、C-IV含量，減少膠原合成；同時(shí)MMP-2水平下降，MMP-9水平升高，增加膠