原位雜交法檢測(cè)胸液細(xì)胞hTERT mRNA對(duì)良、惡性胸腔積液鑒別診斷價(jià)值的研究.pdf

1、目的:以常規(guī)胸液細(xì)胞學(xué)檢查作對(duì)照,探討用原位雜交(ISH)細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)胸液細(xì)胞中人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)mRNA對(duì)良、惡性胸腔積液的鑒別診斷價(jià)值.方法:首先摸索、建立"地高辛標(biāo)記的寡核苷酸探針兩步原位雜交檢測(cè)胸液細(xì)胞hTERT mRNA"的實(shí)驗(yàn)方法,其主要操作步驟為:制備細(xì)胞涂片,預(yù)處理后,以地高辛標(biāo)記的寡核苷酸探針對(duì)胸液細(xì)胞hTERT mRNA行兩步原位雜交,再通過(guò)后續(xù)的抗原-抗體-酶-顯色途徑,將hTERT mRNA信號(hào)測(cè)

2、出.所有操作均在低溫狀態(tài)下,設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照.在實(shí)驗(yàn)方法建立后,隨機(jī)對(duì)103例胸腔積液初治病例行ISH法檢測(cè)胸液細(xì)胞hTERT mRNA的前瞻性研究.實(shí)驗(yàn)研究嚴(yán)格遵照盲法原則,與臨床診療各自獨(dú)立進(jìn)行,相互不交換信息.所有納入病例均在留取實(shí)驗(yàn)用胸液標(biāo)本時(shí),同步送胸液細(xì)胞學(xué)檢查,對(duì)首次胸液細(xì)胞學(xué)檢查陰性但臨床上不能排除惡性胸腔積液的病例,臨床采取反復(fù)多次送檢(至少3次,以下簡(jiǎn)稱反復(fù)胸液細(xì)胞學(xué)檢查)及其它檢查,以期明確病因.在所有實(shí)驗(yàn)完成后,