柱狀黃桿菌的系統(tǒng)發(fā)育和生物學特性研究.pdf

1、柱形病是一種全球性的危害極廣的細菌性病，其病原為黃桿菌科的柱狀黃桿菌(Flavobacteriumcolumnare)。柱狀黃桿菌主要危害魚類的鰓組織，是引發(fā)細菌性爛鰓的主要病原之一，其在我國流行較廣且危害嚴重，是草魚(Ctenopharyngdonidellus)、鱖(Sinipercachuatsi)等重要養(yǎng)殖魚類的主要病原。本研究以我國分離的引起柱形病的病原為對象，對柱狀黃桿菌的系統(tǒng)發(fā)育及生物學特性進行研究，為柱形病的防治奠定理論

2、基礎。 為進一步認識柱形病在我國的發(fā)生情況，在發(fā)生柱形病的病魚中分離細菌性病原，經(jīng)過感染試驗、五步法鑒定，并結(jié)合16SrDNA序列分析，證實柱狀黃桿菌(Flavobacteriumcolumnare)是所分離的爛鰓病的病原之一。同時，也證實，上世紀曾經(jīng)命名為爛鰓(gill-rot)病病原的魚害粘球菌(MyxococcuspiscicolaLu，Nie＆Ko，1975)是柱狀黃桿菌的同物異名。利用分離到的16株柱狀黃桿菌的16Sr

3、DNA序列，以及已經(jīng)發(fā)表的柱狀黃桿菌的相關序列，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現(xiàn)柱狀黃桿菌聚成三枝，與已經(jīng)報道的柱狀黃桿菌的三種基因組型(genomovar)相對應，其中當時命名為魚害粘球菌的強毒株G4與分別分離自日本和美國的兩株聚為一枝。第II和第Ⅲ枝包括的菌株較多，它們中的一些菌株來源于相同的魚類宿主，如鯉形目的種類；但是，這兩枝也包括一些特有的株，如從歐洲和美國的鮭形目種類上分離的柱狀黃桿菌聚在第II枝，這一枝還包括我國曾經(jīng)命名為魚害粘球菌的

4、G18弱毒株，從我國隸屬于鱸形目的鱖魚和鱘形目的中華鱘上分離到的柱狀黃桿菌則聚在第三枝。 以柱狀黃桿菌三個菌株：G4(基因組型I)、G18(基因組型II)、Z4(基因組型Ⅲ)為試驗對象，測定各菌株的生化特性，觀察其在不同的溫度、鹽度、pH條件下生長情況。結(jié)果表明：柱狀黃桿菌具有抗托普霉素、新霉素和氧化發(fā)酵蔗糖等生化特性，不能用neo作為該菌遺傳操作標記；柱狀黃桿菌對NaCl和pH敏感，pH4.5，pH9.2，0.8％、1％、2％

5、NaCl處理時間超過30min，大部分條件下菌落數(shù)均極顯著低于對照組(P<0.01)；將pH和NaCl結(jié)合試驗，pH4.5，NaCl超過0.8％，浸泡時間長于30min，三株柱狀黃桿菌均無菌落生產(chǎn)；G4、G18、Z4菌株在24-32℃生長較好。G4在37℃，重現(xiàn)子實體，其形態(tài)與湖北省水生生物研究所魚病研究室描述一致，推測子實體是柱狀黃桿菌在適應新環(huán)境時一種特殊菌態(tài)。 利用G4、Z4為參考菌，測定菌懸液的濁度值(OD600)并用平