異氟烷預(yù)處理對大鼠肝臟部分缺血再灌注的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 本實(shí)驗(yàn)通過觀察在體大鼠肝部分缺血再灌注損傷下肝臟組織線粒體形態(tài)學(xué)的改變，探討異氟烷預(yù)處理對大鼠肝臟部分缺血再灌注是否具有保護(hù)作用。通過肝臟線粒體游離鈣和線粒體通透性轉(zhuǎn)運(yùn)通道的變化進(jìn)一步探討異氟烷預(yù)處理的作用機(jī)制。
　　 材料與方法：
　　 一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組
　　 清潔級健康的SD雄性大鼠60只，體重250-350g，隨機(jī)分成五組，每組12只，假手術(shù)組(S組)；入腹后只分離肝十二指腸韌帶，但

2、不阻斷肝門血供；缺血再灌注組(IR組)：肝臟缺血60min，再灌注120min：異氟烷預(yù)處理組(ISO組)：肝臟I/R前60minISO預(yù)處理30min，后在空氣中洗脫30min：CsA+ISO組：CsA(MPTP特異性阻滯藥)50mgkg-1腹腔內(nèi)注射，30min后同ISO組。CsA組：I/R前30minCsA50mgkg-1腹腔內(nèi)注射。
　　 二、動(dòng)物模型的制作
　　 參照在體大鼠全肝缺血-再灌注損傷模型的制作方法加

3、以改進(jìn)，10％水合氯醛(0.35g·kg-1)腹腔內(nèi)注射麻醉，采用腹部弧形切口，入腹后分離肝十二指腸韌帶，應(yīng)用無創(chuàng)動(dòng)脈央阻斷肝左葉及中葉血流60min后松開動(dòng)脈央，再灌注120min，Iso組于缺血前60min置于實(shí)驗(yàn)艙內(nèi)，持續(xù)吹入異氟烷和空氣30min，維持艙內(nèi)濃度在1.2-1.5％左右(Datex-Ohmeda氣體監(jiān)護(hù)儀監(jiān)測)，再放入空氣中洗脫30min，各組均在再灌注120min后取部分肝臟組織2.5％戊二醛固定，制作電鏡標(biāo)本。另

4、一部份置于-80℃液氮保存，用以制備線粒體懸液。
　　 結(jié)果：
　　 一、肝臟線粒體超微結(jié)構(gòu)變化
　　 ISO組線粒體結(jié)構(gòu)較完整，嵴及內(nèi)膜間隙仍清晰可見，與S組比較未見明顯損傷，IR、CsA+ISO和CsA組線粒體渾濁腫脹，嵴斷裂、溶解，內(nèi)呈空泡狀。
　　 二、肝臟線粒體Ca2+濃度的變化
　　 IR組Ca2+濃度明顯高于S組和ISO組(P<0.01)，而CsA+ISO組Ca2+濃度明顯高于ISO

5、組(P<0.01)；說明ISO預(yù)處理抑制了IR后Ca2+濃度升高，而這種作用在事先用MPTP特異性阻滯藥CsA后被取消。
　　 三、MPTP開放程度(△S)的變化
　　 IR組有較低的△S值，即較大MPTP開放，與S組和ISO組比較有顯著差異(P<0.01)，而CsA+ISO組的AS值明顯低于ISO組(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 部分缺血再灌注對肝臟有損傷作用，而異氟烷預(yù)先吸入對大鼠肝臟部分缺血