脂聯(lián)素受體2、中介素在大鼠非酒精性脂肪性肝病發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf

1、目的:通過高脂飲食建立非酒精性脂肪性肝病大鼠模型,檢測AdipoR-2和IMD以及MDA不同時間點的含量變化,研究在NAFLD的發(fā)病中AdipoR-2和IMD的改變與機(jī)體氧化應(yīng)激之間的關(guān)系,從而進(jìn)一步探索NAFLD的發(fā)病機(jī)制。
　　 方法:健康成年♂Spague-Dawlay(SD)大鼠40只,體重150～180g,按隨機(jī)表法隨機(jī)分為2組,設(shè)立2W、4W、8W、12W模型組(F組,20只),并設(shè)立同時相正常對照組(C組,20只)

2、,F組和C組中每個時相內(nèi)含5只大鼠。正常對照組采用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),模型組采用高脂飼料喂養(yǎng)(高脂飼料配方:膽固醇2％,膽酸鈉0.5％,蔗糖5％,豬油10％,基礎(chǔ)飼料82.5％),兩組均自由飲用自來水。造模2、4、8、12周末時分別處死對照組及模型組大鼠各5只,心臟采血檢測大鼠的血清轉(zhuǎn)氨酶(AST、ALT)以及膽固醇(TC)和甘油三酯(TG),以觀察大鼠非酒精性脂肪性肝病模型肝脂變的進(jìn)展；然后迅速取出肝臟稱肝濕重,計算肝指數(shù):肝濕質(zhì)量／體質(zhì)量

3、×100％。取肝組織標(biāo)本,制備石蠟切片,行蘇木精-伊紅(HE)染色觀察肝組織光鏡下的病理改變,并觀察肝臟脂肪變的程度；免疫組織化學(xué)法檢測脂聯(lián)素受體2(AdipoR-2)在肝組織中的表達(dá)情況；ELISA法檢測中介素(IMD)的含量；硫代巴比妥酸法測丙二醛(MDA)含量。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((X)±S)表示,兩組間比較采用t檢驗,組內(nèi)比較采用方差分析,方差齊者采用單因素方差分析,方差不齊者采用H檢驗；計數(shù)資料采用卡方檢驗；兩者相關(guān)性分析

4、采用直線相關(guān)分析；P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:實驗大鼠40只全部進(jìn)入結(jié)果分析。(1)血清生化學(xué)指標(biāo):模型組AST、ALT和TC、TG隨著造模時間的逐漸延長與正常組相比明顯升高。(2)病理學(xué)觀察:①肝臟大體觀察:肉眼可見大鼠正常組肝臟呈鮮紅色；而模型組肝臟肉眼觀即可發(fā)現(xiàn)肝臟顏色變黃,甚至呈灰黃色,有油膩感,肝臟體積增大。②組織學(xué)觀察:正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,肝竇網(wǎng)狀纖維疏松。模型組4、8、12周大鼠肝組織出現(xiàn)中到重度

5、肝細(xì)胞脂肪變性,隨著造模時間延長脂變程度、氣球樣變程度逐漸加重,均高于對照組(P<0.05)；造模后期出現(xiàn)少數(shù)纖維化表現(xiàn)。③造模組大鼠肝臟可見程度不等的小葉內(nèi)炎癥、匯管區(qū)炎癥,2、4、8、12周造模組肝臟的炎癥活動度評分均高于對照組(P<0.05)。HE染色顯示,造模2～4周大鼠未見肝組織纖維化,到造模12周有1只大鼠出現(xiàn)竇周纖維化。(3)正常組大鼠體內(nèi)IMD含量在實驗過程中沒有出現(xiàn)明顯變化,平均180.55pg／ml。模型組大鼠IMD

6、含量則隨著造模時間的延長而逐漸降低,與正常組比較存在顯著差異(t’=11.55,P<0.001)；模型組內(nèi)各時間段之間IMD含量也存在顯著差異(P<0.001),但正常組和模型組組織與血清IMD間無明顯差異(P>0.05)。IMD與肝脂肪變性程度、炎癥活動度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.966,r=-0.971；P<0.01)。(4)正常組AdipoR-2染色均表現(xiàn)為局部散在的淺黃色,模型組表現(xiàn)為黃棕色,隨時間延長逐漸加深,與正常組相比表達(dá)量有較

7、明顯的增高(P<0.001)。AdipoR-2與肝脂肪變性程度、炎癥活動度呈正相關(guān)(r=0.924,r=0.897；.P<0.01)。(5)模型組大鼠隨著喂養(yǎng)時間的延長,其體內(nèi)血清MDA含量逐漸增加。正常組均數(shù)為1.99±0.83nmol／ml,模型組均數(shù)為4.75±1.82nmol／ml；二者間存在差異且有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-6.77,P<0.001)。相關(guān)性分析顯示AdipoR-2表達(dá)與MDA水平呈正相關(guān)(r=0.823,P<0.01

8、)；血清和組織內(nèi)IMD的表達(dá)量與MDA水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.919,r=-0.902；P<0.01)。MDA與肝脂變和炎癥水平呈正相關(guān)(r=0.92,r=0.938；P<0.01)。
　　 結(jié)論:(1)通過高脂飼料建模的方法,成功構(gòu)建了非酒精性脂肪性肝病大鼠模型,縮短了建模時間,降低了實驗成本且模型基本符合人類發(fā)病的自然狀態(tài)。(2)在非酒精性脂肪性肝病大鼠模型中,機(jī)體氧化應(yīng)激程度與肝損傷程度密切相關(guān),隨著脂肪變、炎癥的不斷加重