2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究重組AdipoQ基因在真核細(xì)胞中的表達情況,利用電穿孔的方法將表達載體導(dǎo)入減毒沙門氏菌并表達,純化蛋白,檢測其在體外對L-02肝細(xì)胞脂肪變性的抑制作用,為人AdipoQ在NAFLD的基因治療方面的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法:(1)從人脂肪組織中提取總RNA,通過RT-PCR方法獲得AdipoQ基因,將其克隆到真核熒光表達載體pEGFP-N1上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-N1-AdipoQ;(2)將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,通

2、過報告基因熒光蛋白的表達、RT-PCR和Western blot檢測其融合蛋白在真核細(xì)胞中的表達;(3)將重組質(zhì)粒pEGFP-N1-AdipoQ通過電穿孔的方法導(dǎo)入減毒沙門氏菌并表達;(4)通過亞克隆法構(gòu)建重組質(zhì)粒pET32a(+)-AdipoQ,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,以IPTG誘導(dǎo)表達pET32a(+)-AdipoQ融合蛋白。表達產(chǎn)物經(jīng)Ni-NTA瓊脂糖樹脂純化后,用Western Blot分析;(5)將融合蛋白作用于油酸誘導(dǎo)脂肪變的

3、L-02肝細(xì)胞,研究其對肝細(xì)胞脂肪變的抑制情況。 結(jié)果:(1)通過RT-PCR方法克隆得到AdipoQ基因片斷,長度為744bp,與目的基因片段大小相一致;(2)重組質(zhì)粒pEGFP-N1-AdipoQ構(gòu)建成功,AdipoQ在真核細(xì)胞中表達,并與熒光蛋白融合; (3)攜帶AdipoQ基因真核表達載體的減毒沙門氏菌株構(gòu)建成功;(4)純化pET32a(+)-AdipoQ融合蛋白;(5)AdipoQ對油酸誘導(dǎo)脂肪變的L-02肝細(xì)

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