外源性一氧化碳對(duì)體外培養(yǎng)星型膠質(zhì)細(xì)胞血紅素加氧酶系統(tǒng)的影響.pdf

1、本文用外源性CO直接處理wistar大鼠大腦皮層星型膠質(zhì)細(xì)胞，排除低氧的影響，觀察外源性CO對(duì)體外培養(yǎng)的wistar大鼠大腦皮層星型膠質(zhì)細(xì)胞HO-CO系統(tǒng)的影響及其作用，從膠質(zhì)細(xì)胞角度探索HO-CO系統(tǒng)在COP所致腦損傷中的變化及其作用，為研究COP及DEACMP的具體機(jī)制提供線索。 方法：進(jìn)行wistar大鼠大腦皮層星型膠質(zhì)細(xì)胞的體外分離、純化培養(yǎng)，用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)表達(dá)。應(yīng)用CCK-8試劑檢

2、測(cè)對(duì)照組、5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/LZnpp-Ⅸ組體外培養(yǎng)的wistar大鼠大腦皮層星型膠質(zhì)細(xì)胞的存活。實(shí)驗(yàn)分組，①對(duì)照組：5﹪CO2+空氣；②CO處理組：1﹪CO+5﹪CO2+空氣；③CO+Znpp-Ⅸ處理組：10μmol/LZnpp-Ⅸ+1﹪CO+5﹪CO2+空氣。各組在37℃培養(yǎng)箱中孵育24小時(shí)，用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)HO-1、HO-2蛋白的表達(dá)。雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)測(cè)定463nm和530nm

3、的吸光度值，計(jì)算膽紅素生成量代表HO活性。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡。 結(jié)果：1.經(jīng)三次傳代培養(yǎng)的細(xì)胞95﹪為GFAP陽性細(xì)胞即星型膠質(zhì)細(xì)胞。2.450nm波長(zhǎng)處吸光度值結(jié)果顯示25μmol/LZnpp-Ⅸ組(2.38±0.0368)和50μmol/LZnpp-Ⅸ組(2.33±0.0339)明顯低于對(duì)照組(2.44±0.0077)、5μmol/LZnpp-Ⅸ組(2.43±0.0021)和10μmol/LZnpp-Ⅸ組(2.43±

4、0.0157)；50μmol/LZnpp-Ⅸ組450nm波長(zhǎng)處吸光度值低于25μmol/LZnpp-Ⅸ組；對(duì)照組、5μmol/LZnpp-Ⅸ組和10μmol/LZnpp-Ⅸ組450nm波長(zhǎng)處吸光度值比較無明顯差異。3.對(duì)照組細(xì)胞HO-1染色為陰性，CO處理組與CO+Znpp-Ⅸ組細(xì)胞胞漿HO-1染色呈陽性；HO-1染色累積光密度值CO處理組(3497.91±180.49)及CO+Znpp-Ⅸ組(3435.25±92.31)顯著高于對(duì)照組

5、(143.53±20.77)，CO處理組與CO+Znpp-Ⅸ組比較HO-1累積光密度值差異無顯著性；對(duì)照組、CO處理組和CO+Znpp-Ⅸ組細(xì)胞胞漿HO-2染色均呈陽性；HO-2染色累積光密度值對(duì)照組(3735.65±133.17)、CO處理組(3724.89±97.19)及CO+Znpp-Ⅸ組(3719.08±85.38)間比較無顯著性差異。4.血紅素加氧酶活性結(jié)果顯示：CO處理組(80.05±6.78)和CO+Znpp-Ⅸ組(64.

6、11±4.35)均明顯高于對(duì)照組(44.28±3.80)，CO+Znpp-Ⅸ組血紅素加氧酶活性明顯低于CO處理組。5.早期凋亡細(xì)胞數(shù)百分比結(jié)果顯示：CO處理組(3.44±0.80)和CO+Znpp-Ⅸ組(8.06±0.99)均高于對(duì)照組(0.18±0.14)，CO+Znpp-Ⅸ組早期凋亡細(xì)胞數(shù)百分比高于CO處理組。 結(jié)論：1.正常情況下wistar大鼠大腦皮層星型膠質(zhì)細(xì)胞只表達(dá)HO-2蛋白；CO誘導(dǎo)wistar大鼠大腦皮層星型膠