基于超順磁性納米微球的心肌肌鈣蛋白Ⅰ定量免疫層析檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf

1、心肌肌鈣蛋白I(cTnI)是組成心肌肌鈣蛋白復(fù)合物的三個(gè)亞基之一，具有高度的心肌特異性，在心肌損傷時(shí)快速釋放入血，被認(rèn)為是診斷心肌梗死的首選心臟標(biāo)志物。早期、方便、快捷測(cè)定人血液中的cTnI有利于盡早對(duì)急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者進(jìn)行危險(xiǎn)分層，并診斷急性心肌梗死，以便及時(shí)對(duì)患者進(jìn)行適當(dāng)干預(yù)，改善預(yù)后。 目前cTnI的臨床檢測(cè)主要依靠中心實(shí)驗(yàn)室，需要大型儀器和專業(yè)操作人員，樣本周轉(zhuǎn)時(shí)間(TAT)較長(zhǎng)，不利于臨床快速診斷、危險(xiǎn)分層和及時(shí)制

2、定治療決策，這已經(jīng)不能滿足快速診斷心肌梗死的需要。而即時(shí)檢測(cè)技術(shù)(POCT)的產(chǎn)生，由于其小型化的儀器、簡(jiǎn)化的操作和結(jié)果報(bào)告即時(shí)化，使TAT 極大縮短，能夠在更短的時(shí)間內(nèi)報(bào)告檢測(cè)結(jié)果，使快速臨床決策成為可能。近幾年，隨著POCT 技術(shù)的迅速發(fā)展，市場(chǎng)上已經(jīng)出現(xiàn)了基于多種原理的cTnI即時(shí)檢測(cè)技術(shù)，其中最多見的是采用固相免疫層析技術(shù)，但往往只能定性或半定量，定量檢測(cè)的靈敏度和一致性也較低。 基于以上研究背景和現(xiàn)狀，本論文提出了一種

3、新型的基于超順磁性納米微球(SPMNB)的快速定量檢測(cè)cTnI的方法，其基本原理是：利用超順磁性納米微球作為標(biāo)記物，由高靈敏度磁性檢測(cè)儀測(cè)量結(jié)合在cTnI-抗體免疫復(fù)合物上超順磁性納米微球所產(chǎn)生的局部磁場(chǎng)效應(yīng)，從而得出所測(cè)cTnI的定量結(jié)果，實(shí)現(xiàn)對(duì)心肌肌鈣蛋白I簡(jiǎn)單、方便、快速的定量檢測(cè)。 本論文通過EDC/NHS法制備得到免疫磁性納米微球，其粒徑為160nm，PDI為0.040，SPMNB 表面抗體偶聯(lián)量為42.03μg/2m

4、gSPMNB。然后利用上述免疫磁性納米微球構(gòu)建磁性免疫層析試紙條，并針對(duì)可能影響其檢測(cè)表現(xiàn)（結(jié)合墊的釋放、假陽(yáng)性的消除、靈敏度的提高）的各種因素，對(duì)試紙條的各個(gè)組成部分進(jìn)行條件優(yōu)化，確定樣品墊大小為0.5×2.5cm2，樣品墊處理液為0.02M BS buffer、0.5％(w/v)NaCl、0.5％(w/v)BSA和2％(w/v)TritonX-100；結(jié)合墊大小為0.5×0.5cm2，處理液為0.8mg/mL免疫磁性納米微球、0.0

5、2M BST buffer、10％(w/v)蔗糖和2％(w/v)海藻糖，NC膜T線單克隆抗體(mAb2)的濃度為2mg/mL，檢測(cè)樣品量為100μL。 在磁性免疫層析試紙條檢測(cè)系統(tǒng)優(yōu)化完成后，構(gòu)建cTnI磁性免疫層析試紙條，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)cTnI樣品，并與傳統(tǒng)兩步雙抗體夾心ELISA法作對(duì)比，結(jié)果顯示磁性免疫層析試紙條的檢測(cè)靈敏度為0.01ng/mL，cTnI濃度與磁信號(hào)線性關(guān)系良好(R2=0.99224)，檢測(cè)時(shí)間小于15分鐘，檢測(cè)