血清肌鈣蛋白-Ⅰ均相化學發(fā)光免疫檢測體系的初步建立.pdf

1、急性心肌梗死(AMI)作為急性冠狀動脈綜合征(ACS)最嚴重的類型，是威脅人類健康的殺手，可致心源性猝死。根據(jù)心電圖的改變，可分為ST段抬高型急性心肌梗死(STEMI)和非ST段抬高型急性心肌梗死(NSTEMI): STEMI有特征性的心電圖改變，便于病人早發(fā)現(xiàn)、早治療，患者的預后較好;而NSTEMI沒有特征性的心電圖改變，此時心肌標志物的檢測對NSTEMI早期診斷和治療顯得尤為重要。心肌肌鈣蛋白I(cTnⅠ)對心肌損傷具有高度的敏感性

2、和特異性，已成為診斷AMI診斷首選心臟標志物，并作為評價心肌壞死和診斷心肌梗死的“金標準”。
　　TnI是心肌主要收縮蛋白的三個亞單位之一，是肌原纖維ATP酶的抑制性亞單位，分為3種亞型:快骨骼肌亞型(fTnI)、慢骨骼肌亞型(sTnI)和心肌亞型(cTnⅠ)。心肌亞型與其他亞型有約40％的異源性，在氨基端延伸出一段31個氨基酸組成的序列，利用此特性，可提高cTnⅠ診斷AMI的特異性和準確性。cTnⅠ經(jīng)歷了常規(guī)方法檢測到高敏感方法

3、檢測幾代檢測方法的改進和臨床應用研究，高敏cTnⅠ(hs-cTnⅠ)在臨床上得到廣泛的認同和應用。本研究以魯米諾氧通道免疫分析技術(LOCI)為基礎，建立一種新的檢測cTnⅠ的定量方法，該方法具有靈敏度高、均相、免清洗、快速簡便等優(yōu)點。
　　目的:
　　以魯米諾氧通道免疫分析技術(LOCI)為基礎，以AlphaScreen均相發(fā)光免疫分析技術為平臺，初步建立血清肌鈣蛋白-Ⅰ(cTnⅠ)均相化學發(fā)光免疫檢測體系，并對其進行方法

4、學和臨床評價。
　　方法:
　　鼠抗人cTnⅠ單克隆抗體、兔抗人cTnⅠ多克隆抗體分別標記受體微球、生物素，組成兩對抗體組合，采用棋盤滴定法確定較佳抗體組合;并利用棋盤滴定法確定標記受體微球和生物素化抗體反應的最適工作濃度，同時對實驗不同階段反應時間、試劑加樣順序、加樣比例以及方法的緩沖體系進行了優(yōu)化。在優(yōu)化基礎上建立四參數(shù)擬合方程的校準品劑量-反應曲線，測定未知濃度臨床標本，得到其發(fā)光信號值，由標準曲線即可得出其相應的cT

5、nⅠ濃度。根據(jù)上述方法對臨床標本進行檢測并做方法學及臨床評價。研究中采用ELISA Calc軟件進行相關統(tǒng)計分析。
　　結果:
　　本法建立的測定cTnⅠ均相免疫檢測體系是由兔抗人cTnⅠ多克隆抗體包被受體微球、生物素標記鼠抗人cTnⅠ單克隆抗體及鏈霉親和素包被供體微球共同組成，該方法快速、敏感，檢測時間為17.5 min;分析靈敏度為0.045 ng/mL，功能靈敏度為0.053 ng/mL;回收率為104.97％-108

6、.12％;批內(nèi)精密度為3.88％-5.53％，批間精密度為7.60％-8.75％;特異性分析中溶血、黃疸及脂血的干擾率均＜10％;采用本方法檢測87例健康人cTnⅠ含量，上限為1.05 ng/mL;檢測40份臨床標本結果與直接化學發(fā)光檢測法所得結果具有良好的相關性(r2=0.979)，使用x2檢驗及一致性分析推斷本試劑與直接化學發(fā)光檢測試劑無統(tǒng)計學差異。
　　結論:
　　本研究建立的方法能夠用于定量檢測血清cTnⅠ，該方法具