磁性免疫層析定量技術(shù)檢測癌胚抗原的應用研究.pdf

1、背景:
　　近年來，全球癌癥發(fā)病率和死亡率不斷上升，癌癥已成為人類死亡的首要原因。隨著醫(yī)學科學技術(shù)的快速發(fā)展，其診療水平顯著提高，但仍不能滿足人類和臨床的需要。許多研究表明，腫瘤標記物在腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、臨床分期、評價療效和預后等方面具有重要意義。早期、便捷、快速、準確的檢測人血液中腫瘤標記物的含量，便于及時發(fā)現(xiàn)腫瘤患者和對其進行適當?shù)母深A，有利于改善預后。目前腫瘤標記物的臨床檢測大多依靠中心實驗室，需要專業(yè)人員操作和大型

2、儀器，樣本周轉(zhuǎn)時間較長而且費用偏高，不利于腫瘤標記物的時實監(jiān)測。
　　上世紀末逐步發(fā)展起來的側(cè)流免疫層析試紙條是一種具有準確、快速、便捷、經(jīng)濟等優(yōu)勢的新型快速免疫檢測技術(shù)，可以在床邊或者采樣現(xiàn)場進行檢測，已被廣泛應用于臨床診斷、療效監(jiān)測等領(lǐng)域中生物標記物的檢測。然而基于膠體金等標記物的光學免疫層析檢測技術(shù)只能定性或者半定量檢測，而且檢測的靈敏度和一致性較低。近年來，基于磁性納米材料的磁信號檢測成為免疫層析定量檢測技術(shù)的研究熱點。<

3、br>　　目的:
　　建立以超順磁性納米微球為標記物的磁性側(cè)流免疫層析試紙條檢測體系，可用于早期、快速、準確、便捷的檢測腫瘤標記物癌胚抗原。
　　方法:
　　1.采用EDC/NHS活化法在羧基官能團修飾的磁性納米微球表面偶聯(lián)抗體制備免疫磁珠并通過掃描電子顯微鏡、紅外光譜檢測儀及BCA蛋白定量檢測試劑盒進行表征。
　　2.優(yōu)化免疫磁珠的制備體系和磁性免疫層析試紙條的各個組成部分，構(gòu)建用于檢測腫瘤標記物CEA的磁性免

4、疫層析試紙條，并對其性能進行測定。
　　3.用創(chuàng)建的本檢測體系和臨床常用的電化學發(fā)光法檢測120例臨床血清樣本，對其檢測結(jié)果進行比較分析，進一步驗證該檢測體系的應用價值。
　　4.對臨床樣本檢測結(jié)果使用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行處理，運用t檢驗、相關(guān)性分析和x2檢驗分析該檢測體系的精確性。取檢驗水準α=0.05。
　　結(jié)果:
　　1.采用EDC/NHS活化法制備的免疫磁性納米微球粒徑均一、分散性良好，性能穩(wěn)定

5、，適于免疫層析系統(tǒng)的構(gòu)建。
　　2.構(gòu)建該磁性側(cè)流免疫層析試紙條的最適磁性微球粒徑為100nm，免疫磁性納米微球制備過程中每毫克磁珠最佳抗體加入量為40μg，最佳的NC膜型號為Sartourius CN140，整個檢測過程可在15分鐘內(nèi)完成。
　　3.該檢測體系定性檢測CEA標準樣品的濃度范圍為10ng/ml～1000ng/ml，定量檢測的范圍為0.1ng/ml～1000ng/ml，并且特異性高，穩(wěn)定性和重復性均良好。

6、>　　4.該試紙條與臨床電化學發(fā)光法檢測臨床血液樣本的檢測結(jié)果相關(guān)性良好(P＜0.05)，本檢測方法批間重復性可(P＞0.05)，具有較高的精密度和穩(wěn)定性。
　　結(jié)論:
　　本研究以超順磁性納米微球為標記物，研制了CEA磁性側(cè)流免疫層析檢測試紙條，通過利用磁信號檢測儀(MAR)能夠?qū)ρ迥[瘤標記物CEA進行定量和可視化檢測，實現(xiàn)了對血液腫瘤標記物快速、簡便、準確檢測的目標，并且降低了檢測成本和提高了工作效率，具有廣泛的應用前