生長抑素受體亞型SSTR3在胃癌中的作用.pdf

1、目的：檢測生長抑素受體亞型SSTR3在胃癌和胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)，初步闡述胃癌中SSTR3的表達(dá)及其意義。 方法：運(yùn)用免疫組化法檢測胃癌組織中SSTR3蛋白的表達(dá)；運(yùn)用免疫熒光化學(xué)法和免疫印跡法Westernblot檢測人胃癌細(xì)胞系SGC7901、AGS、MKN45和永生化胃上皮細(xì)胞系GES中SSTR3蛋白的定位和表達(dá)；運(yùn)用RT-PCR法檢測SSTR3mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：SSTR3蛋白定位于胃癌細(xì)胞膜，在正常胃組織則彌

2、散分布于胃粘膜層的細(xì)胞胞漿和粘膜下基質(zhì)；與40例正常胃組織呈高表達(dá)相比，SSTR3蛋白在20例胃高分化腺癌中表達(dá)明顯降低，20例胃低分化腺癌中則幾乎未見表達(dá)；胃上皮細(xì)胞和胃癌細(xì)胞系SSTR3mRNA和蛋白的表達(dá)也呈現(xiàn)正?！叻只头只饾u降低趨勢。 結(jié)論：SSTR3基因和蛋白在胃癌組織及胃癌細(xì)胞系中表達(dá)明顯低于正常胃組織及胃上皮細(xì)胞系，提示SSTR3可能與胃癌的生長和分化有關(guān)。 目的：觀察生長抑素類似物octreoti

3、de對胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響，探討生長抑素受體亞型SSTR3在介導(dǎo)生長抑素引起胃癌細(xì)胞增殖和凋亡變化中的作用。 方法：運(yùn)用四氮唑藍(lán)(MTT)法檢測octreotide對胃癌細(xì)胞系SGC7901、AGS和MKN45以及永生化胃上皮細(xì)胞系GES細(xì)胞增殖的影響；運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡率；并使用SSTR3特異性抗體進(jìn)行抗體干預(yù)實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果：(1)Octreotide可不同程度地抑制胃癌細(xì)胞系SGC7901、AGS、MKN

4、45和胃上皮細(xì)胞系GES的增殖，其效應(yīng)與藥物劑量呈明顯的正相關(guān)，但在不同的細(xì)胞系抑制程度存在顯著的差異性，對于缺乏SSTR3表達(dá)的MKN45細(xì)胞，octreotide的抑制作用明顯弱于表達(dá)SSTR3的SGC7901細(xì)胞和GES細(xì)胞，低表達(dá)SSTR3的AGS細(xì)胞介于二者之間；(2)Octreotide可有效地誘導(dǎo)SGC7901細(xì)胞和GES細(xì)胞發(fā)生凋亡，對AGS細(xì)胞和MKN45細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用較差；(3)使用SSTR3特異性抗體對SGC7

5、901進(jìn)行了抗體干預(yù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示聯(lián)合使用SSTR3抗體時(shí)，octreotide對胃癌細(xì)胞的增殖抑制作用減弱，誘導(dǎo)凋亡作用喪失。 結(jié)論：生長抑素類似物octreotide通過SSTR3的介導(dǎo)可有效地抑制胃癌細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡。 目的：生長抑素及其類似物抑制腫瘤細(xì)胞的生長主要是由腫瘤組織中生長抑素受體介導(dǎo)的。但對于大多數(shù)胃癌，由于缺乏生長抑素受體的表達(dá)，生長抑素及其類似物并不起作用。本實(shí)驗(yàn)擬通過基因轉(zhuǎn)移使原來不

6、表達(dá)SSTR3基因的胃癌細(xì)胞再表達(dá)，為生長抑素和SSTR3基因治療胃癌提供有效途徑。 方法：從永生化胃上皮細(xì)胞系GES中提取總RNA，經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增出SSTR3基因，并構(gòu)建真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染不表達(dá)SSTR3的胃癌細(xì)胞系MKN45，以MTT法、流式細(xì)胞儀和電鏡等觀察轉(zhuǎn)染SSTR3基因前后使用octreotide對胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響。 結(jié)果：克隆的SSTR3基因測序正確；構(gòu)建的真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-S