氣虛血瘀大鼠模型表征及生物學(xué)基礎(chǔ)相關(guān)研究.pdf

1、長(zhǎng)期以來，由于受研究思路、技術(shù)水平等多種因素限制，氣虛血瘀證生物學(xué)基礎(chǔ)研究仍處于艱難探索階段。其中，中醫(yī)臨床與現(xiàn)代生物學(xué)研究模式的差異是其主要原因之一，導(dǎo)致相關(guān)生物學(xué)指標(biāo)研究缺乏與氣虛血瘀證相關(guān)聯(lián)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，影響了其科學(xué)性和客觀性的評(píng)價(jià)?？偨Y(jié)氣虛血瘀證生物學(xué)基礎(chǔ)既往研究中的經(jīng)驗(yàn)與不足，973課題組提出了“因、脈、證、治”的建模思路和氣虛血瘀表征模型的概念，以此為依據(jù)，本課題對(duì)氣虛血瘀大鼠模型宏觀表征及部分生物學(xué)指標(biāo)進(jìn)行了研究，探討氣虛血

2、瘀證生物學(xué)基礎(chǔ)研究的客觀評(píng)價(jià)方法。 目的： 1.探討在中醫(yī)理論指導(dǎo)下的氣虛血瘀動(dòng)物模型制作方法； 2.探索氣虛血瘀動(dòng)物模型宏觀表征研究與評(píng)價(jià)方法； 3.部分揭示氣虛血瘀證微觀生物學(xué)基礎(chǔ)； 4.探索氣虛血瘀證生物學(xué)基礎(chǔ)研究的客觀評(píng)價(jià)方法。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)研究 (1) 根據(jù)“勞則耗氣”中醫(yī)理論，從病因角度入手，以力竭游泳為造模手段，建立游泳→力竭氣虛→氣虛血瘀的動(dòng)物模型，確定

3、氣虛血瘀動(dòng)物模型的制作方法；選取不同的時(shí)間點(diǎn)(1w、2w、4w)，從外觀狀況、體重、平均進(jìn)食量、游泳時(shí)間、精神狀態(tài)評(píng)分、排便情況、舌質(zhì)評(píng)分、復(fù)合電生理檢測(cè)、行為學(xué)檢測(cè)、舌圖照相等方面對(duì)模型大鼠宏觀表征進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，篩選模型大鼠能夠反映氣虛血瘀特征的敏感宏觀表征。 (2) 動(dòng)態(tài)觀察(1w、2w、4w)模型大鼠血漿葡萄糖(glucose，GLU)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceric

4、he，TG)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein，HDL)、低密度脂蛋白(low-densitylipoprotein，LDL)及血黏度、紅細(xì)胞變形及聚集指數(shù)、凝血相關(guān)指標(biāo)等的變化，從能量代謝及血液流變學(xué)改變角度探討氣虛血瘀證生物學(xué)基礎(chǔ)。 (3) 用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定心、腦組織超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)；用硫代巴比妥酸法(thibabituric acid，TBA

5、)測(cè)定心腦組織丙二醛(malondialdehyde，MDA)：用硝酸還原酶法檢測(cè)心、腦組織一氧化氮(nitric oxide，NO)；用放射免疫法檢測(cè)心、腦組織內(nèi)皮素(endothelin，ET)、血漿腫瘤壞死因子-α(tumor-necrosis factor，TNF-α)、血漿白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)，從氧化應(yīng)激損傷、血管活性物質(zhì)失衡、組織炎性損傷等角度探討氣虛血瘀證生物學(xué)基礎(chǔ)。 2 .宏微

6、觀指標(biāo)多元分析研究 在實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，運(yùn)用典型相關(guān)分析方法，分析敏感表征與其它表征及微觀指標(biāo)的相關(guān)性；對(duì)與敏感表征相關(guān)度較高的微觀指標(biāo)進(jìn)行判別分析，篩選敏感微觀指標(biāo)，探索氣虛血瘀生物學(xué)基礎(chǔ)研究的客觀評(píng)價(jià)方法。 結(jié)論： 1.氣虛血瘀證表征模型研究 模型大鼠在力竭游泳后表現(xiàn)出精神狀態(tài)差、體重下降、游泳時(shí)間縮短、曠場(chǎng)分析中央格時(shí)間延長(zhǎng)、短暫的排便增多等表征，分別與氣虛證的倦怠、消瘦、乏力、懶動(dòng)、便溏等證候特征

7、相應(yīng)，為反映氣虛的敏感表征；舌質(zhì)的紫黯為反映血瘀的敏感表征。相關(guān)敏感表征以造模4w時(shí)最為典型。以上敏感表征的確立證明力竭游泳法復(fù)制的氣虛血瘀動(dòng)物模型符合中醫(yī)理論特征，相關(guān)表征可以反映氣虛血瘀證部分臨床特征。 2.氣虛血瘀證生物學(xué)基礎(chǔ)研究 能量代謝與血液流變學(xué)改變是氣虛血瘀證重要的生物學(xué)基礎(chǔ)；脂質(zhì)過氧化損傷及血管調(diào)控失常是氣虛血瘀模型大鼠器官損傷的重要病理機(jī)制；本模型中無明顯的炎性反應(yīng)。由此得出模型大鼠組織器官損害并不顯著