肝郁脾虛證的模型復(fù)制及相關(guān)方劑作用的生物學(xué)基礎(chǔ).pdf

1、本研究首先依據(jù)中醫(yī)關(guān)于肝郁脾虛證的發(fā)病學(xué)說、臨床表現(xiàn)和其涉及到某些現(xiàn)代疾病的生病理變化特點(diǎn)，探索運(yùn)用復(fù)合病因造模法復(fù)制出肝郁脾虛證大鼠模型，通過神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)中的多指標(biāo)觀察，以獲得模型的中醫(yī)證候及部分生物學(xué)特點(diǎn)；在此基礎(chǔ)上，比較觀察具有疏肝、健脾和疏肝健脾功用的柴胡疏肝散、四君子湯和柴疏四君湯三方對該肝郁脾虛證模型的作用異同，探討異方同證條件下的三方效用與病證模型之間的關(guān)聯(lián)性和關(guān)聯(lián)的部分現(xiàn)代生物學(xué)基礎(chǔ)。故本課題以研究不同方劑與同

2、一對應(yīng)主治證之間的關(guān)系為切入點(diǎn)，為進(jìn)一步揭示和探索“方證相關(guān)”這一邏輯命題提供實證依據(jù)。 論文分為文獻(xiàn)綜述和實驗研究兩部分。文獻(xiàn)綜述部分主要對肝郁脾虛證的臨床與實驗研究進(jìn)展、柴胡疏肝散、四君子湯及柴疏四君湯的臨床與實驗研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。實驗研究部分主要從肝郁脾虛證模型的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)、胃腸功能的變化、柴胡疏肝散、四君子湯及柴疏四君湯對模型神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)、胃腸功能變化的影響及柴疏四君湯對模型甲狀腺軸、能量代謝、血

3、循環(huán)變化的調(diào)節(jié)作用三方面進(jìn)行了探討。 研究一：肝郁脾虛證模型的建立 方法：將大鼠隨機(jī)分為正常組和肝郁脾虛模型組，每組40只。模型組大鼠采用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)法造模，將大鼠于每天上午8：00置于束縛盒中限制3小時，下午2：00置于盛有溫水(22±1℃)的大塑料桶中游泳10分鐘。隔日喂食(隔日禁食，隔日足量給食)，連續(xù)3周。然后停止造模自然恢復(fù)一周。分別于造模的第一、二、三、四周取材，用鄰-甲苯胺法測尿D-木糖

4、排泄率，用高效液相色譜-電化學(xué)法檢測單胺神經(jīng)遞質(zhì)，用試劑盒放免法檢測血清GAS、IL-1β、IL-2、IL-6、TNF；血漿MTL、SS、VIP、ACTH、CORT；下丘腦CRH的含量。 結(jié)論：該模型大鼠表現(xiàn)出部分類似肝郁脾虛證的癥狀，存在小腸吸收功能障礙、中樞單胺類遞質(zhì)和胃腸功能、免疫系統(tǒng)、HPA軸功能的紊亂。結(jié)果提示本模型符合中醫(yī)肝郁脾虛證且存在胃腸功能紊亂和神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)中多環(huán)節(jié)的調(diào)節(jié)障礙。 研究二：柴胡疏

5、肝散、四君子湯、柴疏四君湯對肝郁脾虛證模型的作用 方法：將大鼠隨機(jī)分為2組：正常組(20只)，造模組(50只)，造模組大鼠按上述制模方法處理三周。于造模第三周末分別從正常組和模型組隨機(jī)各取大鼠10只取材。第四周停止造模，造模組動物隨機(jī)分成肝郁脾虛模型(gypx)、柴胡疏肝散(Chsgs)，四君子湯(Sjzt)、柴疏四君湯(Cssjt)四組，每組10只。中藥三組分別按1ml·100g-1體重給予柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君湯灌胃

6、，連續(xù)7天，每日1次。模型組和對照組分別給予等量蒸餾水。用HE染色觀察肝細(xì)胞病理變化，用硝基四氮唑藍(lán)法觀察肝細(xì)胞琥珀酸脫氫酶的變化，余檢測方法同研究一。 結(jié)論：肝郁脾虛模型使大鼠神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)、胃腸功能、肝細(xì)胞線粒體功能異常改變，柴疏四君湯在調(diào)節(jié)肝郁脾虛模型神經(jīng)內(nèi)分泌免疫、胃腸功能、肝細(xì)胞線粒體功能異常改變方面優(yōu)于柴胡疏肝散和四君子湯。 研究三：柴疏四君湯對肝郁脾虛大鼠模型的其他作用 方法：將大鼠隨機(jī)分為

7、正常組(20只)和模型組(20只)。模型組按上述方法制模，于造模第三周末分別從正常組和模型組隨機(jī)各取大鼠10只取材，第四周停止造模，造模組動物隨機(jī)分成肝郁脾虛模型(gypx)、柴疏四君湯(Cssjt)兩組，每組各10只。柴疏四君湯組按1ml·100g-1體重給予柴疏四君湯灌胃，連續(xù)7天，每日1次。模型組和對照組分別給予等量蒸餾水。用放免法檢測血漿TXB2、6-keto-PGF1a、血清TSH、T3、T4，用比色法檢測血清Na+-K+-A

8、TP酶，用高效液相法檢測肝組織能荷，用血液粘度測試儀檢測血流變。 結(jié)論：肝郁脾虛證模型存在甲狀腺功能、能量代謝、血流變學(xué)及TXA2-PGI2平衡的異常改變。柴疏四君湯可通過改變這些異常狀態(tài)而對肝郁脾虛模型進(jìn)行調(diào)節(jié)。 本課題觀察到采用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)法建立肝郁脾虛證模型，出現(xiàn)了胃腸功能、神經(jīng)內(nèi)分泌免疫、血循環(huán)、能量代謝及肝細(xì)胞病理改變，獲得了肝郁脾虛證的某些生物學(xué)特點(diǎn)，為評價肝郁脾虛證模型提供了一定的實驗依