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文檔簡介
1、腫瘤目前仍是臨床難以治療的疾病之一,對人類的健康有很大危害,現(xiàn)在臨床治療腫瘤的主要方法是手術(shù)、化療、放療,一方面給病人帶來生存的希望,同時也給病人帶來較大創(chuàng)傷?;煛⒎暖煾弊饔幂^大,使病人恢復(fù)的較慢,多年來眾多學(xué)者一直在尋找尋找有效治療惡性腫瘤的藥物,尤其是篩選高效、低毒、低成本的天然藥物,倍受生物學(xué)和醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。 姬松茸(Agricus blazei Murill)又名小松菇、柏氏蘑菇、巴西蘑菇,屬擔(dān)子菌亞門,層菌綱,傘菌目
2、,蘑菇(黑傘)科,蘑菇(黑傘)屬。1965年,日裔巴西人古本隆壽將在巴西圣保羅皮埃達德郊外農(nóng)場草地上采到的一種不知名的美味食用菌送到了日本。日本三重大學(xué)農(nóng)學(xué)部的巖出亥之助教授對這種無名菌種進行了菌種分離和培養(yǎng)實驗,并取名為姬松茸,中文為小松口蘑之意。1967年,由比利時的海涅曼博士鑒定為新種,并命名為,與雙孢蘑菇Abisporus同屬。此后,開始了姬松茸的基礎(chǔ)研究。1975年,日本的室內(nèi)高壟栽培法首次獲得成功,經(jīng)努力改良才確立了現(xiàn)在的大
3、規(guī)模人工栽培方法。1995年中國科學(xué)院植物所梁凈教授用來自巴西原始森林的野生菌種在福建栽培成功,命名為國產(chǎn)姬松茸。多年來,很多學(xué)者對姬松茸的有效成分及其藥用價值進行了深入的研究,發(fā)現(xiàn)姬松茸多糖具有抗腫瘤、提高機體免疫力及抗突變、殺菌作用,還可改善肝臟功能并促進造血。因此該物質(zhì)已受到人們的廣泛重視。但是,姬松茸多糖對哪些腫瘤有抑制作用,尤其是作用的分子機理是什什么都有待深入研究。關(guān)于姬松茸多糖的抗癌性,國內(nèi)外學(xué)者主要是用姬松茸粗提物和荷瘤
4、小鼠進行研究,而無人將姬松茸分離純化后的有效成分處理白血病細胞和胃癌細胞進行抗腫瘤研究。 因此,本研究采用噻唑藍(MTT)還原法、流式細胞分析技術(shù)、DNA瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)、端粒酶活性測定、Caspase-3蛋白表達分析、bcl-2蛋白表達分析及光鏡和透射電鏡觀察等技術(shù)和方法對Agaricus blazei Murrill水溶性多糖提取物FA-2-b-β和AZT的誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡,F(xiàn)A-2-b-β對化療藥的增敏作用及其相應(yīng)機理等
5、進行了深入研究。結(jié)果表明: 1.FA-2-b-β可明顯抑制體外培養(yǎng)人胃癌MKN45細胞和人急性早幼粒細胞性白血病HL-60細胞的增殖。FA-2-b-β作用72h對人胃癌MKN45細胞的抑制率可達49.44%以上,而對人急性早幼粒細胞性白血病HL-60細作用96h抑制率高達82%:AZT可明顯抑制體外培養(yǎng)人胃癌MKN45細胞的增殖,作用72h后抑制率高達56.37%.證明FA-2-b-β、AZT具有良好抗癌效果。 2.實驗
6、首次證明, AzT、FA-2-b-β可明顯誘導(dǎo)體外培養(yǎng)人胃癌MKN45細胞和人急性早幼粒細胞性白血病HL-60細胞的凋亡。并能改變上述細胞的細胞周期時相分布,使細胞在G<,1>期發(fā)生嚴重阻滯,這是誘導(dǎo)人胃癌MKN45細胞和急性早幼粒細胞性白血病細胞HL-60凋亡的重要分子機理之一。 3.本實驗同時證明,AZT、FA-2-b-β可使體外培養(yǎng)人胃癌MKN45細胞和人急性早幼粒細胞性白血病HL-60細胞的端粒酶活性明顯降低,這是提取物
7、抑制體外培養(yǎng)人胃癌細胞和人急性早幼粒細胞白血病細胞增殖的又一重要分子機理。 4.本研究首次發(fā)現(xiàn),AZT、FA-2-b-β可上調(diào)體外培養(yǎng)人胃癌MKN45細胞和人急性早幼粒細胞性白血病HL-60細胞的Casase-3基因表達水平。這是提取物誘導(dǎo)該細胞凋亡、細胞周期改變和細胞增殖在G1期發(fā)生阻滯的重要分子基礎(chǔ)。 5.同時發(fā)現(xiàn)ATT可使體外培養(yǎng)人胃癌MKN45細胞細胞的bcl-2基因的表達水平降低,是該細胞凋亡、細胞周期改變和細
8、胞增殖在G1期發(fā)生阻滯的又一重要分子機制,并與Caspase-3基因表達的改變相互協(xié)調(diào)、相互促進來誘導(dǎo)體外培養(yǎng)人胃癌MKN45細胞的凋亡。 6.本實驗還首次證實,F(xiàn)A-2-b-β聯(lián)合AZT明顯高于單獨用藥組,F(xiàn)A-2-b-β對AZT具有增效作用。 綜上所述,AZT、FA-2-b-β對人胃癌MKN45細胞和人急性早幼粒細胞性白血病HL-60細胞的增殖均有明顯抑制作用,可明顯誘導(dǎo)上述惡性腫瘤細胞的凋亡,使細胞增殖發(fā)生明顯阻滯
9、;對惡性腫瘤細胞凋亡的誘導(dǎo)又與抑制其端粒酶活性、改變Caspase-3和bcl-2基因表達水平有密切關(guān)系。同時發(fā)現(xiàn)FA-2-b-β聯(lián)合AZT明顯高于單獨用藥組,F(xiàn)A-2-b-β對AZT具有增效作用。研究表明,從國產(chǎn)姬松茸多糖中分離的RNA蛋白復(fù)合物FA-2-b-β本身具有一定的抑制癌細胞效果,又能減輕化療藥物(AZT)的毒副作用,對化療藥物(AZT)有增效作用,如與化療藥物(AZT)結(jié)合使用,可能會在不降低療效的前提下,減少化療藥物(A
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