姬松茸（Agaricus blazei Murill）提取物組分體外抗病毒和抗腫瘤活性研究.pdf

1、姬松茸(Agaricus blazei Murill)原產(chǎn)于美國(guó)、巴西等地，又名巴西蘑菇，其水溶液的酒精沉淀物中含有大量姬松茸多糖、糖蛋白復(fù)合物、甾醇類等物質(zhì)，具有抗病毒、抗癌等生物學(xué)功能。姬松茸提取物組分具有綠色、低毒、應(yīng)用后對(duì)人體毒副作用小等特點(diǎn)，為新型天然抗病毒、抗腫瘤藥物的研究及制備提供了良好的材料。 本文通過(guò)熱水浸提、梯度酒精沉淀和真空冷凍干燥等方法，得到了5種姬松茸提取物組分(E1～5)，成分分析實(shí)驗(yàn)證明蛋白和多糖是

2、這5種組分的主要組成成分。利用大菱鲆鰭細(xì)胞(turbot fin cells，TF細(xì)胞)進(jìn)行的5種組分的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，5種姬松茸提取物組分在濃度低于1.0 mg/mL時(shí)，對(duì)TF細(xì)胞沒(méi)有任何毒性，而濃度高于1.5 mg/mL時(shí)，細(xì)胞雖然透光性依然很好，但是開(kāi)始收縮變圓，且細(xì)胞的形態(tài)改變同姬松茸提取物組分的濃度成正相關(guān)。 通過(guò)5種姬松茸提取物組分對(duì)淋巴囊腫病毒(lymphocystis disease virus，LCDV)

3、感染TF細(xì)胞的過(guò)程的影響來(lái)研究姬松茸提取物組分與LCDV的相互關(guān)系。結(jié)果顯示：用5種姬松茸提取物組分，尤其是E5組分(1.0mg/mL)處理2h后的LCDV感染TF細(xì)胞，能夠明顯抑制LCDV感染所導(dǎo)致的TF細(xì)胞病變程度。將LCDV和5種姬松茸提取物組分混合后感染TF細(xì)胞，也能明顯抑制LCDV感染所引起的TF細(xì)胞病變，表明姬松茸提取物組分可能有直接滅活病毒和/或阻斷病毒吸附細(xì)胞的作用。TF細(xì)胞經(jīng)LCDV吸附4h后再添加姬松茸提取物組分培養(yǎng)

4、，細(xì)胞病變程度并不改變，表明5種姬松茸提取物組分對(duì)LCDV在TF細(xì)胞內(nèi)的繁殖并無(wú)顯著的抑制作用。 為闡明姬松茸的抗腫瘤作用及機(jī)理，本文利用人宮頸癌細(xì)胞(human cervical carcinoma cell line，HeLa)、人肝癌細(xì)胞(human hepatocellularcarcinoma cell line，HepG2)、人胃癌細(xì)胞(human gastric carcinoma，cell line，SGC)，通

5、過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)，光學(xué)顯微鏡觀察，瓊脂糖凝膠電泳，透射電鏡等方法，對(duì)所得的5種姬松茸提取物組分體外誘導(dǎo)3種腫瘤細(xì)胞凋亡的作用進(jìn)行了研究。細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，5種提取物組分對(duì)HeLa、HepG2、SGC細(xì)胞均有不同程度的抑制作用，E4組分的抑制3種腫瘤細(xì)胞增殖效果最好。添加E4組分，濃度為1.5mg/mL，培養(yǎng)HeLa、HepG2、SGC細(xì)胞72h，抑制率分別為84.04％、77.79％、60.27％。HeLa、HepG2、SGC細(xì)胞經(jīng)E4組分處

6、理后出現(xiàn)核固縮、膜起泡、凋亡小體形成等現(xiàn)象，并且瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示典型梯狀條帶(DNA ladder)。然而，同樣濃度的E4組分并不能誘導(dǎo)TF細(xì)胞和人角膜內(nèi)皮細(xì)胞(human corneal endothelial，HCE)發(fā)生DNA片段化，表明姬松茸提取物具有細(xì)胞選擇性毒性的特征。 綜上所述，本文利用熱水浸提、酒精沉淀等方法得到了5種姬松茸提取物組分，并研究了它們?cè)隗w外抗病毒感染以及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等方面的作用。為全面查清